ADN polymérase

radioactive Leur position, variable selon les individus est alors visualisée sur un film photographique Pour mieux comprendre et visualiser le déroulement voici les étapes décrites et détaillées qui permettent de mettre en évidence le polymorphisme de l' ADN. Purification et extraction: Dès que le laboratoire génétique reçoit les échantillons biologiques prélevés, tous les scientifiques se mettent au travail afin d'en extraire l'ADN. Le protocole expérimental général de l'extraction est le suivant :

L’ADNc TAT par PCR : Le principe de la Polymerase Chain Reaction est d’obtenir en grande quantité un fragment d’ADN précis. Pour cela il faut un fragment d’ADN de base (celui que l’on veut dupliquer), des nucléotides (dNTPs), des amorces choisies pour amplifier que la partie qui nous intéresse, une ADN polymérase (ici la Taq polymérase isolé de la bactérie thermophilus aquaticus résistante à de hautes températures) et des cofacteur de l’ADN polymérase (MgCl2…). Le mécanisme est le suivant : 5’

PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) Amplification des acides nucléiques PCR RT-PCR PCR en temps réel Et leurs applications La PCR : une révolution technologique en biologie moléculaire APPLICATIONS : - Médecine légale * Identification d’un suspect * Recherche de paternité - Détection de microorganismes pathogènes (à ADN ou à ARN) - Diagnostics préimplantatoire et prénatal - Etude de l’expression des gènes - Détection de mutations - Agroalimentaire (OGM) Etude d’un cycle de PCR 1

mise au point en 1985 par Kary Mullis, qui obtint pour ces travaux le prix Nobel de Chimie en 1993. Aujourd’hui, ce procédé révolutionnaire couplé à l’utilisation d’une ADN polymerase thermorésistante permet d’obtenir, sans clonage, une amplification considérable d’un fragment donné d’ADN. Principe : La réaction PCR (Polymerase Chain Reaction) permet d'amplifier in vitro une région spécifique d'un acide nucléique donné afin d'en obtenir une quantité suffisante pour le détecter et l’étudier. Pour

d’initiation spécifique à l’ADN double brins spécifique des ADN polymérases dépendantes à l’ADN thermostables. Les propriétés d’hybridation et des hybridation des brins complémentaires d’ADN en fonction de la température. 1.2 Les acteurs de la PCR La PCR comporte plusieurs acteurs : L’ADN : Avant la réaction de PCR, l’ADN est extrait à partir de l’échantillon que l’on veut analyser (salive, cheveux, cellules, fossile…). Puis, cet extrait purifié en ADN, contenant le fragment d’ADN que l’on souhaite amplifier

traduction. Ces deux processus sont étroitement couplés chez les procaryotes, alors qu'ils sont spatialement et temporellement séparée chez les eucaryotes. La transcription est le processus de copie du matériel génétique (ADN ou ARN) en ARN. Chez les eucaryotes, trois ARN polymérases (ARNpol) interviennent : l'ARNpol I ou A pour les ARN ribosomiques transcrits dans le nucléole (28S, 18S et 5,8S), l'ARNpol II ou B pour les ARNm, et l'ARNpol III ou C pour les petits ARN (ARNt, ARNr 5S, ARNsn). Intéressons-nous

étroit avec une personne infectée. Une fois dans le sang, le virus atteint le foie et se multiplie dans ses cellules, les hépatocytes. Le système immunitaire détruit les cellules infectées, entrainant une inflammation du foie. Il s'agit d'un virus à ADN responsable d’une forme particulière d’hépatite virale, une maladie initialement connue sous le nom d’hépatite sérique2 et à l’origine d’épidémies dans certaines parties de l’Asie et de l’Afrique. L'hépatite B est endémique en Chine et diverses autres

de nouveaux virions. Les 2 ou 3 éléments principaux éléments constituant un virus : 1/ Génome : ADN ou ARN. 2/ Capside. 3/ Présence (= virus enveloppé) ou absence (= virus nu) de l’enveloppe. 2/ Eléments constitutifs d’un virion. a/ Eléments constitutifs d’un virion. → Structures obligatoires (propres à tous les virus): - Génome : un seul type d’acides nucléiques, c’est-à-dire ADN ou ARN, simple ou double brin, circulaire ou linéaire. - Capside : structure protéique protégeant le

(27 Novembre 2009) Chimiothérapie Antivirale Développement lent et difficile • Dues à 3 propriétés intrinsèques des virus – Leur parasitisme intracellulaire strict – Leur incapacité à s autorépliquer s’autorépliquer – Leur diversité (Virus à ADN, à ARN) • La chimiothérapie va se heurter à 3 obstacles : – L’interférence avec le métabolisme cellulaire normal (risque de cytotoxicité) – La variabilité génétique des virus – Son incapacité à éradiquer l’infection virale latente • Action virostatique

Phosphatase alcaline Chapitre 2 : 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 2.10 2.11 2.12 2.13 Les polymérases DNA polymérase (réaction) DNA polymérase (exonucléase 3’→5’) DNA polymérase (fonction d’édition) DNA-polymérases (tableau) DNA pol I (E. Coli) Fragment de Klenow T4 DNA polymérase Sequenase Taq polymérase Reverse transcriptase RNA polymérase II (réaction) RNA polymérases (phages) Poly(A) polymérase Chapitre 3 : 3.1 3.2 3.3 3.4 Les ligases DNA ligase (réaction) DNA ligase (E. Coli)