Cytochrome c oxydase

contenant les protéines solubles (F5). Lors du TP, les différentes fractions ont été soumises à différents dosages d’activités enzymatiques telles que l’activité de lactate déshydrogénase, l’activité de la glucose-6-phosphatase, l’activité de la cytochrome C oxidase. Ces dosages nous ont permis de mettre en évidence la localisation subcellulaire de l’enzyme dosée. Ce TP nous a permis de définir ce qu’est une enzyme marqueur et de replacer chacune des activités dosées dans leur voie métabolique

Complexe 3 = Ubiquinone – Cytochrome C réductase (complexe B – C1) Il existe un type de protéines (x 2) = cytochrome, contenant du fer et des groupements hèminiques = hémoprotéines. 2 types de cytochromes ici : Cytochrome B (architecture) Cytochrome C1 Il y a aussi présence de centres Fe-S et d'ubiquinone. On le retrouve en double exemplaire dans la membrane interne (organisation dimérique), contrairement aux autres complexes. d. Complexe 4 = Cytochrome C oxydase : 13 Protéines dont

dans la membrane interne mitochondriale. Cette chaîne de transport d'électrons est constituée de quatre complexes enzymatiques : • complexe I : NADH déshydrogénase • complexe II : succinate déshydrogénase • complexe III : cytochrome b-c1 • complexe IV : cytochrome c oxydase La chaîne respiratoire permet de réoxyder les coenzymes NADH et Ubiquinone   réduits au cours du cycle de Krebbs. Cette réoxydation s'accompagne de la création d'un gradient transmembranaire de protons qui va servir à fabriquer

de l’oxydase :  But : Différencier chez les bacilles Gram - les Entérobactéries des pseudomonas.  Principe : Dans la chaîne respiratoire, le dernier cytochrome qui transfert les é à l’o 2 est appelé cytochrome oxydase ou aa3. Sa présence chez une bactérie ne peut être mis en évidence que si la cellule possède ainsi le cytochrome c. Ces 2 cytochrome ont la propriété d’oxyder le diméthyle ou le tétraméthyl paraphénylène diamine en une semi-quinone colorée en rouge. Cyt c +++ + Cyt aa3 +++ + Réactif

final) => respiration aérobie ( accepteur final 02) a]réactions cytochromiques ( au niveau membrane plasmique) - transfert par cytochromes qui font passer de forme oxydée à réduite, O2 dernier accepteur - Test de la catalse : cytochrome c particulier → bactéries à oxydases positives ( cytochrome c présent)( coloration rouge violacée) et bactéries à oxydases négatives B] réactions non cytochromiques : - formation formes dérivés de l'O2, présences d'enzymes auto-oxydantesqui détoxifient :

bâtonnet et produisant des colonies foncées à reflets vert métallique en moins de 24 heures, à 35 °C sur un milieu de type m-Endo contenant du lactose. De plus, tous les coliformes totaux doivent produire une réaction négative à l’épreuve de la cytochrome-oxydase et une réaction positive au test de l’ONPG (ortho-nitrophényl-ß-D-galactopyranoside). Les coliformes totaux sont des microorganismes indicateurs dont le dénombrement permet de déceler le niveau de pollution d’origine organique dans les eaux

cellulaire et en mesurant l’activité succinate-cytochrome c réductase, in vitro, de la chaîne respiratoire. Pour cela on va extraire les mitochondries du parenchyme de pomme de terre par centrifugations différentielles, pour ensuite préparer une fraction mitochondriale nous donnant accès à la membrane interne, et par conséquent aux chaînes respiratoires. On va ainsi pouvoir étudier l’activité succinate-cytochrome c réductase en mesurant le passage du cytochrome c de la forme oxydée à la forme réduite à

Passage passif des petites molécules par la porine de la membrane externe Espace inter-membranaire • c’est un espace d’une épaisseur de 4 à 7 nm dense • il contient : • Des protons H+ : rôle dans la phosphorylation • Des molécules de cytochrome c : rôle dans l’apoptose • Des molécules inférieure à 10 KDa Membrane interne • C’est une bicouche lipidique de 5 à 6 nm • Organisation très différente de celle de la membrane externe • 80 % des protéines et 20 % des lipides • Riche en

perte d’électrons / Réduction : gain d’électrons La chaine respiratoire : 4 complexes + 2 transporteurs mobiles d’électrons (Coenzyme Q, cytochrome c) + ATP synthase (F1 et F0). Complexe 1 : NADH déshydrogénase : NADH  NAD+ + H+ Complexe 2 : succinate déshydrogénase : succinate  fumarate. Complexe 3 : cytochrome b-c1 Complexe 4 : cytochrome c oxydase : ½ O2 + 2H+  2 H2O Le gradient électrique du aux réactions de la chaine respiratoire va être la source de production de l’ATP au niveau de

Sources d’émission de CO II) Au contact du sang Le monoxyde de carbone se lie à l’hémoglobine* (réduction de la capacité de transport de l'oxygène), à la myoglobine* (baisse de la capacité de stockage de l'oxygène), et au cytochrome oxydase mitochondriale* (inhibition de la respiration cellulaire). Ainsi, on assiste à la formation de la carboxyhémoglobine* (COHb) - la théorie la plus généralement admise est que la toxicité du monoxyde de carbone repose sur la formation de carboxyhémoglobine