Cytométrie en flux

non permissives est promoteur dépendant. Pour mieux évaluer l’efficacité de ces promoteurs dans les cellules non permissives (cellules S2 de drosophila), les chercheurs ont effectué une cryométrie de flux afin de déterminer le taux d’expression d’EGFP : Fig2B : Analyse par cytométrie de flux de l’efficacité d’expression de L’EGFP par les promoteurs (hsp70, actine5C et MT). Le taux le plus élevé d’expression de l’EGFP est observé pour le promoteur hsp70. L’expression d’EGFP est légèrement

Le Cytomètre de flux : Le cytomètre en flux est un appareil permettant la quantification et la qualification individuelle de cellules en fonction de leur taille, de leur fluorescence (liée aux pigments naturels ou aux marqueurs fluorochromiques) en réponse à une stimulation lumineuse. Le cytomètre en flux détecte la capacité d’une cellule à diffracter la lumière incidente et à émettre une fluorescence. L’échantillon entre sous pression dans la chambre d’analyse, entouré par un liquide de

étude du chimiotactisme in vitro (chambre de Boyden), - étude de la phagocytose in vitro de germes de levures ou de particules de latex. Cette technique peut maintenant être abordée par la cytométrie en flux, - étude du pouvoir bactéricide : formation de radicaux oxygénés, réalisable aussi par cytométrie en flux. B - LES POLYNUCLEAIRES EOSINOPHILES (P.E.) 1 - Morphologie Le polynucléaire éosinophile est aisément reconnaissable sur frottis sanguin : cellule de taille moyenne (10 à 15µ)

condition retour plastique et ne prolifèrent pas dans le méthocel (A), alors que les CHO prolifèrent dans toutes les conditions(B). Cependant leur temps de génération semble s’allonger en condition méthocel. A B Fig. 2 : Analyse par cytométrie en flux. Après chaque comptage et repiquage 60000 cellules sont récupérées et fixées à l’éthanol, afin de déterminer le nombre de cellules dans les différentes phases du cycle cellulaire. Pour la lignée 3T3 les cellules sont bloquées en phase G1 dans

contactsintercellulaires en utilisant des protéases et/ou une agitation légère. ⁃ 2 ème étape : dissocier les cellules entre elles (car un tissu regroupe différents types de cellules - en fonction des propriétés physiques ⁃ cytométrie de flux Purification sur support Cytométrie de flux La séparation des cellules se fait grâce aux Ag naturellement présents à la surface des cellules - séléction négative : correspond à la solution contenant les cellules non reconnues par l'Ac. C'est la plus utilisée car

un audit par ce même comité est organisé afin de recontrôler à nouveau le fonctionnement et le déroulement des analyses du laboratoire. Présentation des automates II Le Sysmex XE 2100 2.1 Principe Le Sysmex XE 2100 est un cytométre en flux permettant la numération des GR (globules rouges), des GB (globules blancs) The analyzer has extended linearity capabilities required for concentrated cell preparations that make up component therapy, eliminating the need for dilution.et des plaquettes

sélectivement les cellules présentant une synthèse d’ADN active, on les incube 48h après leur transfection par les siARNs précédents avec du BrdU (bromodesoxyuridine) pendant 30 min. On réalise alors une cytométrie de flux présentant les résultats suivants (Fig2): Fig.2. Analyse en cytométrie de flux des cellules HCT116-WT, HCT116-p53-/- et HCT116-p21-/-, après transfection avec un siARN témoin (siControl) ou les deux siARNs dirigés contre FOXF1 (siFOXF1-1 et siFOXF-2). L’incorporation du BrdU a été

phycoérythrine : La phycoérythrine est une phycobiliprotéine. C'est un pigment rouge que l'on trouve chez certaines cyanobactéries, la plupart des algues rouges et certains cryptophytes. Il est utilisé comme marqueur fluorescent, lors de cytométrie en flux ou de microscopie confocale par exemple. Chromatographie :La chromatographie est une technique physique de séparation d'espèces chimiques. L'échantillon contenant une ou plusieurs espèces est entraîné par un courant de phase mobile le long

24,5 % 2 933 /mm3 6,7 % 802 /mm3 285 000 /mm3 9,5 µm3 16,0 (4 000 000 - 5 000 000) Impédancemétrie (12 - 16) Hémoglobine Volume Globulaire Moyen Hématocrite T.C.M.H. C.C.M.H. Index de Distribution des Hématies LEUCOCYTES Cytochimie-Cytométrie de flux (80 - 95) (30 - 45) (27 - 34) (32 - 36) (10 - 16) (4 000 - 10 000) Polynucléaires neutrophiles Soit Polynucléaires éosinophiles Soit Polynucléaires basophiles Soit Lymphocytes Soit Monocytes Soit PLAQUETTES Volume moyen plaquettaire Index

Co-molécules de reconnaissance Pas de lymphocytesT chez les enfants athymiques (DiGeorge) ou les souris nude Moyens d’étude des populations lymphocytaires • Identification des marqueurs de différenciation • Utilisation d’anticorps monoclonaux • Cytométrie en flux • Techniques de biologie moléculaire • Etude d’animaux génétiquement modifiés : – Transgénèse introduction d’un gène supplémentaire dans le génome – Inactivation génique (KO) inactivation ciblée d’un gène Marqueurs de différenciation •