Phosphatase

ÉTUDE CINÉTIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DÉTERMINATION DU pH OPTIMUM BUT: Connaître les caractéristiques de la phosphatase alcaline tels que la Vm, le Km et le pH optimum. Lors de ce T.P. On étudiera donc les propriétés phosphatase et alcaline de cette enzyme. Une phosphatase est une enzyme qui hydrolyse un monoester phosphorique et forme un phosphate et un alcool ou un phénol: R-O-PO32- + H2O → R-OH + HPO42- Pour connaître le Vm et le Km de cette enzyme, on a besoin

TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES TRAVAUX PRATIQUES SUJET 21 Durée : 7 heures Coefficient : 9 BIOCHIMIE (8 points) Durée : 3 heures DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES KM et Vmax D’UNE ENZYME L’enzyme étudiée est la phosphatase alcaline. On utilise la cinétique d’hydrolyse du PNPP (paranitrophényl phosphate) à 30°C et à pH = 9,8. PNPP + H2O ----------------- PNP + Phosphate Le PNP (paranitrophénol) jaune en milieu alcalin est dosé par photométrie d’absorption moléculaire

DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE D'UNE REACTION ENZYMATIQUE COURBE [P] = f (t) I. PAR METHODE CINETIQUE L'enzyme étudiée est la phosphatase alcaline qui catalyse l'hydrolyse des liaisons esters lorsque l'acide engagé est l'acide phosphorique mono estérifié. On utilise la cinétique d'hydrolyse du PNPP (ParaNitroPhényl Phosphate) à 20°C à pH=9,8. Le PNP (ParaNitroPhénol) est jaune en milieu alcalin. On peut donc suivre l'apparition du PNP au cours de l'hydrolyse en enregistrant l'absorbance

Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000 UI/L 0,5 . 10-3 L x 30 min • L’activité d’une enzyme du sérum est de 3500 UI/L

metallothionein1 et metallothionein 2. La seconde voie de l’hypertrophie des muscles squelettiques que l’on retrouve en parallèle avec celle de l’IGF-1 est celle de la calcineurine (Figure 1). La calcineurine (CaN) est une protéine sérine/thréonine phosphatase (PP2B), complexe de 3 sous-unités : une sous-unité catalytique (Cn A), une sous-unité régulatrice (Cn B) et un domaine de liaison de la calmoduline/Ca2+ (Schulz et Yutzey, 2004). Principalement activée par les niveaux de Ca2+ intracellulaire,

Licence mention BiologieBiochimie Programme L1: pages 2-9 Programme L2: pages 10-19 Programme L3: pages 20-31 1 Licence mention BiologieBiochimie Programme 1ère année (non-contractuel): Inscription dans le portail BGC, poursuite en BB en 2ème semestre Licence Biologie-Biochimie, 1ère année X1T0020 X1T0010 X1A0010 X1B0020 X1B0010 X1C0010 X1G0010 X1X0010 X2HS050 X2A0010 X2B0040 X2B0030 X2B0020 X2B0010 X2C0040 X2G0020 X2I0040 X2P0060 Préparation au Certificat Informatique Internet niveau

de déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme afin d’étudier l’influence de la concentration en substrat et de la présence d’un inhibiteur sur la vitesse de réaction. Dans ce TP, nous allons utiliser une préparation commerciale de phosphatase alcaline de veau. Il s’agit d’une enzyme alcaline à 2 substrats, capable d’hydrolyser les monoesters phosphoriques selon la réaction suivante : R-O-PO3 2- + H2O R-OH + HPO4 2- II. Principe Afin de suivre la réaction

DETERMINATION DU pH OPTIMUM DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation de phosphate minéral et d'un alcool ou d'un phénol, selon la réaction : R-O-PO32- + H2O  R-OH + HPO42- Méthodologie La manipulation permet l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la réaction enzymatique. L'enzyme utilisée est une préparation commerciale partiellement purifiée de phosphatase intestinale de veau, la réaction

IFTAB II EXERCICES D’ENZYMOLOGIE Exercice 1 : CALCUL D’ACTIVITES La lactase hydrolyse le lactose en glucose et galactose. On détermine la vitesse d’hydrolyse du lactose par la lactase (β-galactosidase) (E.C. 3.2.1.23) dans les conditions initiales. Il apparaît 0,672x10-2 moles de glucose en 10 minutes. On a introduit dans le milieu 1 mL de solution enzymatique dont la teneur en protéines est de 2,85 g.L-1. a) Ecrire l’équation de la réaction b) Que signifie le terme « conditions initiales »,

BCH2008L Enzymologie et Métabolisme ___________________________________________________________________ Page | 1 ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases (EC 3.1.3.1) sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation d’un ion phosphate et d'un alcool (ou d’un phénol), selon la réaction : R-O-PO3 2- + H2O  R-OH + HPO4 2- Méthodologie Le but du TP est d’étudier l’influence de la concentration de initiale substrat ([S]0)