DENOMBREMENTS DES MICRO-ORGANISMES

Méthodes de dénombrements directes :

Cellule de THOMA :
Lame de verre épaisse creusée de 2 gouttières avec, entre les 2, un quadrillage de dimensions connues. L’épaisseur de liquide entre la lame et la lamelle est contrôlée et connue (0,1 mm). Le volume de comptage est donc calculée : V= (côté carré)2 x hauteur (en mm3, x 10-3 si expression en mL).
Numération des cellules totales (vivantes et mortes) par carré : N cellules
Concentration cellulaire = (N/V) x facteur dilution
Convient bien pour les organismes en culture, pas trop petits, peu agrégés, non mobiles. Méthode précise mais un peu fastidieuse (nécessité de compter un nombre suffisant de cellules pour avoir une précision suffisante). Dénombrement total car difficile de distinguer entre cellules vivantes et cellules mortes. Néanmoins, une coloration cytologique préalable (discriminant les cellules vivantes des cellules mortes) permet de contourner ce problème.

Compteur de particules (COULTER counter) (présentation optionnelle)
Dénombrement automatique des cellules en suspension dans une solution d’électrolyse : 2 électrodes de platine, sous tension continue, situées de part et d’autre d’un tube percé d’un micro-orifice, plongent dans un électrolyte. Une aspiration en haut du tube entraîne le passage des cellules à travers l’orifice (= déficit d’un volume d’électrolyte correspondant au volume de la cellule ------> augmentation de la résistance du circuit)
Numération des cellules totales (vivantes et mortes).
La suspension ne doit pas contenir de particules inertes de même taille que les cellules. Convient pour les organismes en culture, non agrégés. Risque fréquent de colmatage de l’orifice.

Cytomètre de flux (présentation optionnelle)
Les cellules doivent être marquées avec des anticorps fluorescents spécifiques ou des fluorochromes (marquant l’ADN). La suspension cellulaire est aspirée et les cellules défilent les unes à la suite des autres devant un