la cytométrie en flux
CMF
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Définitions
Mesure ( -métrie) des propriétés optiques de cellules ( cyto) transportées par un liquide vecteur (flux) jusqu’à une source d’excitation lumineuse.
Mesurer simultanément plusieurs paramètres sur plusieurs milliers de cellules par seconde
Combinaison de système fluidique, optique, informatique et électronique
moyen utilisé : fluorescence
quantifier et analyser des particules en suspension
Rapidité, spécificité, reproductibilité, beaucoup informations sur même échantillon
Les composants d’un cytomètre
Combinaison de systèmes différents :
Fluidique :
flux laminaire, passage des cellules une à une devant le laser
Séparation et alignement des particules , tri, vitesse d’analyse et de tri
Optique :
laser , diodes , miroirs dichroïques, filtres, détecteurs
Source(s) lumineuses , sélection spectrale des longueurs d’ondes
Electronique
Collection de la lumière émise et transformation des signaux optiques en signaux électroniques
PMT: PhotoMultiplicaTeur => amplification de la lumière émise
Digitaliseur: Transformation signaux électriqies en dignaux numérique
Ordinateur: traitements et stockage des donées grâcee au logiciel
Analyse des données:
Affichage et analyse des données,
Analyses multivariées
Identification et quantifiaction des populations
La composante fluidique
Echantillon= cellules en suspension liquide Liquide vecteur ou de gaine
Echantillon et liquide gaine injectés dans le cytomètre
Eau distillée ou solution saline (PBS) pour analyse
Solution saline pour le tri
Par seringue
Par un système pressurisé
Pas de mélange entre liquide de gaine et échantillon
ECOULEMENT LAMINIARE
Optique - les sources de lumière
Les LASERS
Faisceau d’une seule longueur d’onde ( raie laser)
Raies de quelques milliwatts à plusieurs watts
Peu onéreux ( refroisissement