I - INTRODUCTION

L’ADN, ou l’Acide Désoxyribonucléique, est, pour tous les organismes, le support de l’information génétique. Chez les Eucaryotes, il est contenu dans le noyau des cellules. Or la biologie moléculaire a pour objectif l’étude de la structure, du fonctionnement et de la régulation de l’expression des gènes qui sont des séquences d’ADN. Ils sont organisés en de très longues molécules qui constituent, en association avec des protéines, les chromosomes.

L’objectif de ce TP est de pouvoir extraire et quantifier de l’ADN issu d’un végétal (ici, les végétaux utilisés seront la laitue et la feuille de tabac).

L’extraction de l’ADN est une technique permettant l’isolation de l’ADN des cellules. On peut résumer l’extraction de l’ADN en 4 étapes avec tout d’abord le broyage, puis la lyse des membranes et dissociation des protéines, l’élimination des protéines et enfin la précipitation de l’ADN par l’isopropanol.

Au cours du TP, une partie de l’ADN extrait va subir divers traitements comme l’hydrolyse par une enzyme de restriction, le traitement avec la RNase et la DNase I. Puis chacun de ces traitements sera ensuite déposé puis analysé par électrophorèse sur gel d’agarose. Ils seront révélés par le bromure d’éthidium qui est un colorant et dont la fluorescence augmente en présence d’ADN. Grâce à cette technique, la présence et la taille des acides nucléiques va pouvoir être étudiée, ainsi que la localisation des sites de restriction spécifiques de l’enzyme utilisée.

L’autre partie de l’ADN sera dosé par spectrophotométrie à une longueur d’onde de 260nm. Cette dernière correspond à l’absorption maximale des acides nucléiques. Cela permettra de quantifier l’ADN et de déterminer sa pureté.
II- Matériels et méthodes

1) Matériels
Cf : annexe 1.

2) Méthodes

( Extraction de l'ADN : On prélève tout d’abord nos échantillons biologiques (tabac et laitue) selon une méthode précise, puis nous les avons pesés. Nous avons ensuite