BIO49 TP d’immunologie

Titrage d’un sérum de lapin par test ELISA

Manipulation : Cette manipulation permet de mettre en évidence la présence d’anticorps spécifique anti-BSA dans le sérum de lapin immunisé à cette antigène et de quantifier ces anticorps par le test ELISA, une technique immunoenzymatique.

Le test ELISA consiste à fixer sur les parois des puits de la plaque ELISA des antigènes en excès (antigène=BSA= Sérum albumine Bovine), afin de monopoliser totalement les parois des puits, ce qui empêche la fixation d’autres protéines. Afin d’enlever les antigènes non absorbés on effectue un lavage. Par la suite on ajoute les anticorps primaires par injection du sérum immunisé contre cet antigène dans les puits. On refait un lavage pour éliminer les anticorps non fixés sur les antigènes ainsi que d’éventuelles protéines contenues dans le sérum. On ajoute les anticorps secondaires qui sont préalablement couplés avec des enzymes, qui sont actifs seulement dans un pH alcalin, et qui sont dirigés vers les anticorps primaires, puis on lave les puits afin d’éliminer les anticorps secondaires non fixés. Enfin, on ajoute le substrat complémentaire à l’enzyme afin de mettre en évidence les anticorps secondaires, liés aux déterminants isotypiques des anticorps primaires, fixés sur le complexe protéique comprenant l’antigène. De ce fait, on met en évidence les anticorps primaires spécifiques à la BSA.

Méthode d’expérimentation :

Tout d’abord, le sérum immunisé contre la BSA contient plusieurs types d’anticorps dirigés contre cet antigène qui se fixent chacun sur un épitope spécifique de la BSA : ce sont les anticorps polyclonaux.
De ce fait, afin de diminuer la quantité d’anticorps contenus dans le sérum immunisé, on effectue des dilutions dans 48 puits différents d’une plaque de dilution qui ne fixe pas les protéines et ne perturbe donc pas la quantité d’anticorps voulu.

On effectue des dilutions en cascade car on ne possède pas le matériel approprié (le