Biosatistique
Mars 2012
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Levure et Histoire
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La levure aujourd’hui en biotechnologie
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Des gènes impliqués dans des maladies humaines retrouvés chez S. cerevisiae
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Morphologie de S. cerevisiae
Haploïde Zygote Diploïde Tétrade
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Le cycle de S. cerevisiae
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L ’ADN de S. cerevisiae
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Transgenèse chez les levures
• • • • Unicellulaire Notion de vecteurs, chromosomes artificiels Modifications génomiques Utilisation et intérêt
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Les vecteurs de S. cerevisiae
– Vecteurs autoréplicatifs
• Haut nombre de copies (dérivé du plasmide 2 micron) : YEp • Faible nombre de copies = monocopie (contenant une séquence centromérique = 125 pb) :YCp
– Vecteurs (intégratifs) ou constructions en vue d’intégration dans les chromosomes – Yac, chromosomes artificiels
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La levure au service de la médecine
Mars 2012
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Principe de sélection de transformants : sélection positive
• Complémentation d’une souche réceptrice auxotrophe • Si pas de souche réceptrice auxotrophe, utilisation de marqueurs dominants.
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Un cas particulier bien utile : sélection positive de mutants du gène URA3 provoquant l’auxotrophie à l’uracile.
OUTSIDE INSIDE Glutamine +CO2 +ATP
URA2
Carbamoylphosphate
Pyrimidines metabolism in S. cerevisiae
URA2
Ureidosuccinic acid URA4 Dihydroorotic acid
URA1
Orotic acid
PRPP
Cytosine
FCY2
URA5 ,URA1O
Cytosine
FCY1 FUR4
Uracil Uracil
Orotidine 5'-phosphate
URA3 FUR1