cytométrie en flux

616 mots 3 pages
Cytométrie en flux :
Fluorochromes : ce sont des composés qui lorsqu’ils sont excité par une lumière retournent a l’état de repos en émettant une lumiere de plus faible energie que celle qui la absorbé. Caractérisé par deux spectres : d’excitation(longueur d’onde d’absorption) et d’émission( longueur d’onde d’émission ). Fluorochrome et molécule étudié de doivent pas interagir, pzs de fixation non spécifique sur les cellules, le spectre d’émisssion doit etre dans le visible, la fluorescence doit etre differenciable de l’autofluo de la cellule, doit etre facileme,t excitable, doit avoir un bon rendement quantique ( emet bcp de lum) facilment couplable a un Ac sans etre dénaturé ou dénaturé l’Ac. Plus populaire des fluorochrome est le FITC a peu pres 300Da puc d’absorption a 388 pic d emission a 488(vert) luminosité dépendante du pH a utilisé a pH=6,2. Autre : PE absorbe a 488 et emet a 578(jaune) PerCP : absorbe a 488 et emet a 678(rouge). Avec meme longueur d’onde on peut avoir info differente. APC : très marquant doit être excité et emet dans le rouge.
Le cytomètre :
La fluidique : système de fluide qui entraine les particules une par une devant un système laser.
Le laser : lumière monochromatique, jusqu’à 4 laser, a l’argon émet a 488, ou à l’hélium émet a 633, percute les particule de façon perpendiculaire, derrière impact système optique qui contient lentilles qui sélectionne les longueurs d’onde émises, miroir détourne les différentes longueur d’onde vers appareil d’analyse, détecteur transforme signal lumineux en signal électrique et mathématique. Forward scatter : info donné par impact du laser ( taille de la molécule)
Side scatter : granularité complexité interne.
Mode opératoire : marquages des échantillons, exemples= cellules isolées du sang, tissus (dissociés). On doit s’assurer que les marqueurs bouge pas donc travailler dans de la glace pour éviter l’endocytose du marqueur ou relargage. Travailler avec l’azide de sodium pour éviter le

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