Electrophorèse en Champs pulsé
Les levures sont des organismes eucaryotes et possèdent un noyau avec des chromosomes linéaires. Chez les Saccharomyces, les chromosomes sont au nombre de 16 simples ou 16 paires selon la forme haploïde ou diploïde de la cellule. Les chromosomes de Saccharomyces cerevisiae ont une taille de 200 à 2500kb, et caractérisée par la présence de 3 chromosomes ou plus dont la taille est inférieure à 500kb. On retrouve aussi d’autres genres de Saccharomyces tel que S.bayanus qui est caractérisée par la présence d’un deuxième chromosome de haut poids moléculaire aux environs de 1300kb, ainsi que deux petits chromosomes dans la région 245-370kb., et S.pastorianus qui est caractérisé par la présence d’un deuxième chromosome de haut poids moléculaire aux environs de 1300kb, et de 3 chromosomes ou plus dans la région 245-370kb. Compte tenu de la taille importante de ces chromosomes, ils ne peuvent être séparés qu’en utilisant 2 champs électriques appliqués de façon alternative. D e ce fait, l’électrophorèse en champ pulsé constitue une technique de choix pour la caractérisation de ces différentes souches de levure
I- BUT DU TP
A l’aide de l’électrophorèse en champ pulsé, on va établir le caryotype de différentes souches de levure (Saccharomyces cerevisiae, S.bayanus et S. pastorianus), puis identifier chacune d’elles en analysant leur profil électrophorétique en le comparant aux caractéristiques de chaque levure.
II- PRINCIPE DE L’ELECTROPHORESE EN CHAMP PULSE
Le principe de l'électrophorèse en champ pulsé consiste à alterner l'orientation du champ électrique au cours du temps. Chaque changement de champ électrique réoriente la molécule d’ADN dans le gel augmentant ainsi la probabilité que la molécule d’ADN soit orientée de façon à passer à travers les mailles du gel. Cette probabilité dépend de la taille de la molécule et la vitesse de migration d'un fragment d'ADN dans le gel varie dans le sens inverse de sa taille.