Elisa
• Nous allons détecter la présence d’anticorps anti-BSA ( Bovine sérum albumine) dans le sérum d’un lapin
La première étape : le
« cotting » a été réalisée par le fournisseur; il s’agit de tapisser le fond des puits avec la BSA par effet électrostatique
Deuxième étape:on verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
Si le lapin est
« contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA
Si le lapin est
« contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA
Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la
BSA qui tapisse le fond du puits.
Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la
BSA qui tapisse le fond du puits. On vide ensuite le puits d’un geste rapide.
Puis le puits est lavé avec une solution tampon twin pour enlever les quelques anticorps non fixés.
Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est couplé à une enzyme: la péroxydase. Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est couplé à une enzyme: la péroxydase. Les anticorps de détection se fixent aux anticorps antiBSA.
Les anticorps de détection se fixent aux anticorps antiBSA.
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin
Quatrième étape:
On verse dans le puits la solution révélatrice contenant le substrat de la péroxydase: le TMB ( tétra-méthylbenzidine).
Le TMB se colore en bleu en présence de l’enzyme Le TMB se colore en bleu en présence de l’enzyme
La coloration bleue indique donc la présence d’anticorps anti BSA.
L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration d’anticorps anti-BSA ;