protocole expérimental culture in vitro
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PROTOCOLE EXPERIMENTAL : LA CULTURE IN VITROI) Nettoyage du matériel
Désinfecter et stériliser le matériel à l’aide d’alcool ou de javel. L’ensemble du matériel qui entrera en contact avec les prélèvements doit être désinfecté et stérilisé. L’expérience doit se dérouler dans un milieu le plus stérile possible (le plan de travail doit être nettoyé également).
II) Prélèvement
Procéder au prélèvement de fragments à diverses parties du végétal, 5 parties vont être testées : Feuille, Fleur, Tige, Racine, Méristème. Pour se faire, utiliser un scalpel (ici, un couteau désinfecté à l’alcool sera utilisé) et couper les éléments de manière précise pour éviter d’endommager le végétal.
III) Désinfection des fragments
Désinfecter les éléments prélevés. Utilisation d’une boite de pétrie divisée en 3 parties. Les végétaux seront déposés dans 3 milieux : alcool, javel et eau distillée. Plonger les prélèvements dans l’alcool durant environ 30-40 sec (Attention ! liquide inflammable) ; ensuite laisser les prélèvements pendant environ 10 minutes dans la javel ; et pour finir, rincer les prélèvements dans 3 bains d’eau distillée.
IV) Préparation du milieu nutritif
Ingrédients utilisés : - 1.5g de Glucose - 1.2g d’Agar Agar - 100mL d’Eau Distillée
Tout d’abord, peser les ingrédients à l’aide d’une balance assez précise (au dixième près).
Diluer dans une petite quantité d’eau distillée l’Agar Agar pour éviter d’avoir des grumeaux. Par la suite ajouter cette solution dans l’eau distillée restante.
Ajouter le glucose dans cette solution Eau distillée + Agar Agar.
Faire chauffer au micro-onde le récipient dans lequel se trouve la solution. La faire chauffer petit à petit jusqu’à ce que la solution devienne translucide (environ à la T° d’ébullition).
V) Finalisation de l’expérimentation
Mettre, dans les tubes à essais, la solution nutritive, encore sous forme liquide, déposer ensuite les prélèvements dans des tubes à essais différents.
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