Tp hémolyse

Pages: 7 (1605 mots) Publié le: 13 mars 2013
8/03/13

Université des sciences
Montpellier II

TP Hémolyse

Baumard Charlotte
Ibtissame Djedoui
Introduction
Les cellules des êtres vivants renferment une concentration en solutés et en eau différente de celle du milieu extracellulaire. Lorsque la concentration du milieu extracellulaire varie, alors des phénomènes de tonicité et d'osmose sont observés. Ils sont possibles grâce à laperméabilité de la membrane. La tonicité est l'effet de l'osmolarité d'une solution sur le volume cellulaire. L'osmose, ou pression osmotique, est la pression qu'il faut exercer pour empêcher le passage d'un soluté à travers la membrane. Ces phénomènes aboutissent à un déplacement en eau du milieu le moins concentré vers le plus concentré, que nous allons voir à travers ce TP.

I – But du TPDans ce TP, nous allons étudier le comportement d'une hématie de rat dans différents types de solution afin de comprendre les effets d'isoosmolarités, d'isotonicité et de résistance globulaire.
II – Matériel et méthodes

Nous avons réalisé 8 tubes à hémolyse contenant 0,5 ml d'une solution différente à chaque fois. Puis nous avons ajouté 2 gouttes de la suspension d'hématie de rat dans chacund'entre eux. Ensuite, on a comparer, de façon macroscopique, chaque solution en fonction son l'aspect (trouble ou limpide) puis après centrifugation la couleur du culot et du surnageant, et de façon microscopique, les formes des hématies. Cela permet de déduire s'il y a eu hémolyse ou plasmolyse ou si elles sont normales.- 1ère Observation macroscopique : solution trouble = cellule normale /Solution limpide = Hémolyse- 2ème observation macroscopique après centrifugation : Culot rouge et surnageant clair = cellule normale  / Culot peu ou pas présent et surnageant rouge= hémolyse- Observation microscopique : Cellule éclatée, pas de cellule = hémolyse / Cellule biconcave = cellule normale / Cellule crénelée = plasmolyseA quoi sert le tube 1 ?A quoi sert la centrifugation ?Quelles informationssupplémentaires apporte l’observation microscopique par rapport aux observations macroscopiques?III - Résultats

Tous nos résultats macroscopiques, microscopiques et calculs sont dans le tableau (voir fiche annexe).
Nous avons développez les calculs suivants :

a) Dilution de NaCl à 3‰
Nous voulons préparer 8ml de solution de NaCl à 3‰ à partir d’une solution mère de NaCl à 12‰. Pour celanous utilisons la formule Ci*Vi / Cf*Vf avec Ci = 12 g/l, Cf = 3 g/l et Vf = 8mlNous trouvons donc Vi = (3*8) / 12 = 2 ml de NaCl 12‰. Afin d’avoir une solution finale de 8ml nous rajoutons 6ml d’eau.
b) Osmolarité de la solution de NaCl à 9‰

La concentration massique de la solution de NaCl à 9‰ est de 9 grammes par litre. Pour calculer son osmolarité nous devons d’abord calculer saconcentration en molaire puis la multiplier par le nombre de particules. Pour cela nous devons diviser sa concentration massique par sa masse molaire : 9/58,5 = 0,154 mol/L. Et comme la solution de NaCl se dissocie en 2 particules :  Na+ et Cl-, nous multiplions par 2 sa masse molaire. Ce qui nous donne : [NaCl]osm = O,154 * 2 = 308 mosmol/l.

c) Pression osmotique de la solution de NaCl à 9‰
D’après laLoi de Van't Hoff ; Π= R*T*CNous avons calculé précédemment la concentration osmotique de cette solution qui était de 308 mosmol/l. Nous travaillons à une température de 37°C que nous mettons en Kelvin, ce qui nous donne 37 + 273 = 310 K. De plus la constante des gaz parfaits est de 0,082 afin de trouver une pression en atmosphères.Ce qui nous donne : Π = 0,082 * 310 * 0,308 = 7,83 atm
d)Osmolarité du plasma à 0,92%

Nous devons d’abord calculer l’osmolarité du plasma pour trouver la concentration de l'urée ; nous savons que l’osmolarité du plasma est équivalente à celle d’une solution de NaCl à 0,92%, et donc à 9,2‰. Nous divisons par la masse molaire du NaCl puis multiplions par 2 car il se dissocie en 2 particules.  Ce qui nous donne : (9,2 / 58,5)*2 = 315 mosmol/lOn peut donc...
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