Lois de la svt
L’équation de Michaelis-Menten décrit la courbe cinétique de Vo-[S]: - Pour des concentrations faibles de substrat, lorsque [S] >Km, V = Vmax et la vitesse est indépendante de la concentration de substrat. - La signification de la constante Km est évidente. Lorsque [S] = Km, V = Vmax/2. Km est la concentration de substrat nécessaire pour que 133 l'enzyme atteigne (1/2) Vmax.
Méthodes graphiques pour la détermination de Km et Vmax
Il y a deux régions d’utilité analytique dans la courbe cinétique de - [S] < 0.1Km (pour la quantification du substrat) Vo-[S]: - [S] > 10Km (pour la quantification d’enzyme) Dans le développement d’un essais enzymatique, il est important de connaître la valeur de Km de l’enzyme et d’ajuster la valeur de Vmax afin que l’essais est accompli dans le minimum de temps requis pour une précision donnée. Il y a quatre méthodes graphiques pour établir les valeurs de Km et Vmax dans des conditions expérimentales données: Lineweaver-Burk, EadieHofstee, Hanes et Cornish-Bowden-Eisenthal. Les quatre méthodes nécessitent des données expérimentales pour la vitesse initiale de la réaction en fonction de la concentration initiale du substrat pour une concentration fixe d’enzyme.
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Données cinétique
0.6 0.5
Vo (∆A340nm/min)
0.4 0.3 0.2 0.1 0.0
0 1 2 3 4 [S] mmol/L 5 6 7
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1. Méthode de Lineweaver-Burk
Le réciproque de l’équation de Michaelis-Menten est très utile pour l’analyse des données de cinétique:
1 K m + [ S] = Vo Vmax ⋅ [S]
qu'on peut aussi écrire
1 Km [S ] = + Vo Vmax ⋅ [S] Vmax ⋅ [S]
et qui se simplifie en
1 1 1 K = + m ⋅ Vo Vmax Vmax [S]
L'avantage de cette transformation mathématique est qu'elle permet de tracer un graphique 1/Vo vs 1/[S] dont la courbe est