Manipulations de biologie moléculaire : mise en évidence de l’arn messager de p53 (protéine « suppresseur » de tumeur) dans une lignée cancéreuse érythroleucémique humaine (hel)
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Manipulations de biologie moléculaire : mise en évidence de l’ARN messager de P53 (protéine « suppresseur » de tumeur) dans une lignée cancéreuse érythroleucémique humaine (HEL)Sommaire
INTRODUCTION 1 Présentation de la protéine P53 2 Culture cellulaire 3 Extraction et dosage des ARN totaux 4.1 Principe 4.2 Protocole expérimental 4.3.1 Extraction (à partir du kit RNeasy Mini Kit, QIAGEN) 4.3.2 Dosage 4.3 Interprétation des résultats
4 Transcription inverse 5.4 Principe 5.5 Protocole expérimental 5.6 Migration électrophorétique sur gel d’agarose
5 Réaction de polymérisation en chaine (PCR) 6.7 Principe 6.8 Protocole expérimental
6 Identification du produit de PCR par électrophorèse sur gel d’agarose 7.9 Principe 7.10 Mode opératoire de l’électrophorèse 7.11.3 Gel d’agarose à 2 % 7.11.4 Préparation de l’échantillon et migration électrophorétique 7.11 Interprétation des résultats
7 Digestion enzymatique par une enzyme de restriction du fragment d’ADN amplifié par PCR 8.12 Principe 8.13 Protocole expérimental 8.14.5 Gel d’agarose à 2 % 8.14.6 Préparation de la digestion enzymatique par Pvu II et migration électrophorétique 8.14 Interprétation des résultats
CONCLUSION
INTRODUCTION
Nous allons mettre en évidence un type d’ARN messager de p53, que l’on trouve dans une lignée cancéreuse érythroleucémique humaine.
Au cours des séances, nous utilisons une lignée HEL qui a été obtenue en cultivant des cellules mononucléées du sang circulant d’un malade présentant une érythroleucémie, après rémission d’une maladie de Hodgkin.
La première étape consiste à extraire et doser les ARN totaux. Puis, nous effectuerons une transcription inverse réalisée en vue d’une réaction de polymérisation en chaine, la PCR.
Pour terminer nous identifierons les produits de PCR,