TP : Dosage des immunoglobulines A sériques par immunodiffusion simple radiale

BUT : Doser les immunoglobulines A dans un sérum de patient
PRINCIPE :
La réaction est de type immunodiffusion simple radiale qui met en présence un antigène soluble et un anticorps spécifique de celui-ci soluble afin de former un complexe immuns sous forme d’un précipité.

L’antigène est déposé dans des puits creusés dans un gel contenant un anticorps purifiés spécifiques de cet antigène. L’antigène diffuse radialement autour du puits. ). Il se forme un anneau de précipitation qui est du à la réaction antigène/ anticorps. Au départ cet anneau se solubilise car on est en excès d’antigène, après un temps suffisant on atteint la zone d’équivalence entre antigène et anticorps (30-48h)
On a pu montrer de façon empirique que la surface de l’anneau du précipité est proportionnelle à la quantité d’antigène introduite et donc de sa concentration.
REALISATION :
On réalise une gamme d’étalonnage d’IgA avec des concentrations connues de 0,5g/L à 2g/L qu’on introduira dans des puits afin d’obtenir pour chaque concentration un anneau de précipitation possédant un diamètre proportionnelle à sa concentration en IgA, qui nous permettra de déduire la concentration en IgA du sérum du patient par son diamètre. On établira une courbe D^2=f(concentration en IgA)

Etalon 1
Etalon 2
Etalon 3
Etalon 4
Solution mère d’IgA (2g/L) (μL)
50
100
150
200
Tampon PBS (μL)
150
100
50
0
[IgA](g/L)
0,5
1,0
1,5
2,0

Schéma :

RESULTATS :

Concentration déposée en g/L