Julie assali Sarah BerthoutAxel FrenaisCoralie HautotEve Hisse | TP CENTRIFUGATION | | | M2 ACEABI | 2012-2013 |

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Sommaire Introduction 2 I. Formation d’un gradient continu de saccharose 3 II. Gradient discontinu 8 III. Détermination de la masse molaire d’une molécule 14 IV. Influence du temps de centrifugation sur la formation d'un gradient. 21 V. Influence de la concentration de percoll sur les gradients. 26 Conclusion 30

Bilan :
Très bon rapport.
Il manque quand même quelques informations. La partie sur la BSA restant la plus fragile.
Bilan :
Très bon rapport.
Il manque quand même quelques informations. La partie sur la BSA restant la plus fragile.

Introduction

La centrifugation permet de séparer des éléments d’un mélange par une force centrifuge développée par un rotor tournant à grande vitesse.

Lors de ce TP, nous réaliserons des centrifugations analytiques qui vont nous permettre de déterminer la masse molaire d’une protéine, l’albumine de sérum bovin.

Nous utiliserons pour cela un gradient de saccharose qui pourra être formé par différentes méthodes. Tout d’abord les gradients continus qui permettent de séparer des composants selon leur taille ou leur masse ; deux méthodes de préparation seront comparées. Les gradients discontinus permettant de séparer les éléments selon leur densité ; deux temps de repos seront comparés.

Le saccharose présente une forte viscosité et osmolarité. C’est pourquoi il sera également utilisé au cours de ce TP un gradient autoformé de percoll. Celui-ci présentant une faible osmolarité et viscosité. La formation du gradient ainsi que la répartition des particules se fait alors au cours de la centrifugation. Nous étudierons également l’influence du temps de centrifugation et de la concentration en percoll du gradient.

I. Formation d’un gradient continu de saccharose

a. But

Le but de cette manipulation est de réussir à former un gradient continu de