TP DIPEP

I°) BUT
Ce TP va nous permettre de déterminer la structure d’un dipeptide grâce à la chromatographie sur couche mince (CCM) . Puis dans un second temps, nous devrons effectuer une seconde CCM qui sera faite après avoir réalisé la réaction de dansylation de notre dipeptide afin de préciser quel acide aminé sera présent sur la partie N-terminale puis connaître la structure intégrale de notre dipeptide.

II°) PRINCIPE L’hydrolyse acide va nous permettre grâce à l’ajout d’acide chlorhydrique (HCl à 12M) à hydrolyser la liaison peptidique - HCl → H++ Cl- . Les ions H+ vont réagir avec l’eau, ce qui va donner - H++H2O→H3O+ Alors que les ions Cl- vont tout simplement acidifier le milieu. D’un point de vue thermodynamique, nous allons apporter de l’énergie pour rompre la liaison peptidique afin de connaître la structure du dipeptide. Ce composé dégrade certains acides aminés lors de l’hydrolyse. Le tryptophane est ainsi dégradé. Alors que l’asparagine et la glutamine deviennent respectivement l’aspartate et le glutamate.

Pour déterminer l’acide aminé en N-terminale, nous avons réalisé une dansylation en ajoutant du chlorure de dansyle. La partie N-terminale va donc se lier plus facilement au chlorure de dansyle, la liaison obtenue sur plus stable qu’une liaison peptidique. Nous obtiendrons un dansylo-dipeptide (Dns-dipep). Puis, après une hydrolyse acide de ce Dns-dipep. Nous observerons 2 parties, un aminoacide libre et un aminoacide sous forme de dansylamination (Dns-aa)

L’acétate d’éthyle va nous permettre de séparer la phase organique de la phase aqueuse. Il faudra prélever la phase organique puis la déposer sur une secinde CCm afin de connaître la structure de notre dipeptide. Pour connaître le résultat après migration, il faudra observer sous lampe UV à 254 nm pour découvrir quel acide aminé est dansylé.

III°) Résultats La première CCM nous permet grâce à des dépôts témoins d’acides aminés, à trouver quels sont les acides aminés