Électrophorèse de protéines et immuno-révélation

3210 mots 13 pages
Électrophorèse de protéines et immuno-révélation

But

Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot

Principe

Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction.

Électrophorèse : Généralités
L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans un champ électrique généré par un courant électrique. Les particules chargées négativement migrent vers l’anode et les particules chargées positivement migrent vers la cathode.
Dans notre cas, la migration a été réalisée sur gel de polyacrylamide. Ce gel est une structure semi-solide issue de la polymérisation entre de l’acrylamide et du bis-acrylamide, qui forment un réseau. Il est composé de deux gels : Un gel de concentration : les dépôts seront tout d’abord en contact avec ce gel, qui a pour but de concentrer les échantillons en une bande fine avant d’arriver au second gel, afin d’éviter un décalage de migration. Un gel de résolution : il a cette fois un rôle de tamis pour séparer les molécules lors de la migration. La concentration en acrylamide peut être modifiée (dans notre cas nous avons utilisé à gel à 10% et un gel à 15%), ce qui modifiera le pouvoir résolutif ou domaine de fractionnement des gels. Ainsi, plus un gel est concentré en polyacrylamide, plus il retient les molécules et ralenti la migration. Un gel peu concentré en polyacrylamide aura des mailles plus importantes et retiendra moins les petites molécules.
La migration d’enzymes marqueurs permet de tracer une courbe de calibration, qui permet de déterminer la masse moléculaire d’une protéine inconnue, si celle-ci entre dans le domaine de fractionnement (zone linéaire de la courbe) :

Log (masse moléculaire) = f (distance de migration)

Électrophorèse SDS-PAGE
L’électrophorèse a été

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