UNIVERSITE MONTPELLIER II
SCIENCES & TECHNIQUES DU LANGUEDOC D.E.U.G. Sciences et Vie S.B.N.
TP3 : Catalase et Peroxydase
Physiologie Végétale
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Introduction
Les études expérimentales que nous allons faire tout au long de ces travaux pratiques sont basées sur la photosynthèse. La plus grande partie des expérimentations est relative à l’activité d’enzymes tel que la catalase et la peroxydase qui interviennent en partie lors de la photosynthèse suivant le type de plantes étudiées (C3 et C4). Nous allons donc dans une première partie mesurer et comparer l’activité de ces enzymes pour les deux types de plantes. Nous démontrerons par la suite la production chez les végétaux de dioxygène par les mécanismes de la photosynthèse.
I. Catalase et peroxydase
Ces manipulations portent sur la comparaison de l’activité enzymatique de la catalse et la peroxydase chez deux plantes, le blé et le maïs qui appartiennent respectivement au type C3 et C4. Lors de la photosynthèse pour les plantes en C3 (quant la lumière et la température sont élevées) il y a un phénomène de photorespiration (captage d’O2 et expulsion de CO2). Ce phénomène à tendance à produire de l’eau oxygénée (H2O2) qui peut être toxique pour les cellules de la plante. Il existe alors deux enzymes, la catalase et la peroxydase qui permettent de détoxiquer l’eau oxygénée en produisant de l’eau et du dioxygène (H2O + 1⁄2 O2). Chez les végétaux en C4 (maïs) ce processus (pour la photosynthèse) ne se retrouve pas, il n’y a donc pas de photorespiration. Nous allons donc mesurer et comparer l’activité de ces deux enzymes chez le maïs et le blé.
A. Extraction
Nous devons récupérer les extraits enzymatiques des feuilles de maïs et de blé, pour cela nous allons récolter 0.500 mg de feuilles des deux plantes. Nous allons ensuite broyer les feuilles (séparément) avec une solution tampon (50 mmol/l et pH 7) qui permet de préserver l’activité enzymatique, le broyat est alors récupéré et centrifugé. Le surnageant