Extraction de glycogene
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Extraction et mise en évidence de la quantité de glycogène présent dans le foieBUT :
La manipulation se déroule en deux temps, il faut en premier lieu extraire le glycogène du foie puis dans un deuxième temps réaliser le dosage de l'échantillon obtenu par rapport à une gamme étalon en utilisant la méthode de Beer-Lambert .
Principe
Il s’agit de comparer l’absorbance de la solution de glycogène obtenue par l’extraction à celle d’autre solution de concentration connue
Mode opératoire a. Matériels
Balance, Broyeur mortier, Fiole à vide, Bêcher, Éprouvette, tubes de centrifugeuse, centrifugation, couteau b. Produits
Foie de volaille frais, Eau iodée, alcool à 95%, lugol, eau distillée, l’acide trichloroacétique TCA à 40% c. Protocole :
Peser et couper en petits morceaux de foie de poulet frais et en le Renduire échantillon de foie en purée en le découpant finement avec les ciseaux directement dans la soucoupe. Récupérer la purée dans un récipient. Ajouter un peu d'eau et écraser les fragments de foie autant que possible avec une un pilon. Le broyat et verser dans un tube. Verser le même volume d'eau dans l'autre tube. Ajouter quelques gouttes de la solution iodée dans chaque tube et mélanger par retournement en bouchant avec le pouce. On dispose d’un morceau de foie d’environ 30g, débarrassé de son sang. Découper environ 20g de cet échantillon en fragments de 2cm de coté. Placer ces fragments dans un bêcher et les recouvrir d’eau.
Remuer avec un agitateur. Tester la présence de glucose dans l’eau avec une bandelette réactive.
Verser les morceaux de foie dans une passoire et les laver sous l’eau du robinet pendant environ 5minutes.
Remettre les morceaux dans le bêcher rincé, recouvrir d’eau, agiter. Refaire le test du glucose (si le test est encore positif, refaire le lavage).
Laisser reposer l’ensemble pendant 20 à 30 minutes à la température du laboratoire.
Au bout de ce temps, agiter légèrement le contenu du bêcher et refaire le test