HPLC
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La spectrophotométrie UV est une méthode d'analyse quantitative de substances simples ayant un large domaine d'usage.Elle est basée sur la propriété de la matière, et plus particulièrement de certaines molécules, d'absorber certaines longueurs d'ondes du spectre UV-visible. Elle permet de réaliser des dosages grâce à la loi de Beer-Lambert qui montre une relation de proportionnalité entre l'absorbance et la concentration, aussi bien qu'une étude structurale des complexes par l'étude des spectres d'absorption. La spectrométrie UV nous a permis de fixer une longueur d'onde d'absorbance maximale pour notre analyse en HPLC.La chromatographie liquide haute performance (HPLC), est également une technique d'analyse très employée. Il existe plusieurs type s de chromatographie HPLC, lors de ce TP nous étudierons plus précisément la chromatographie de partage sur phase inversée.
Lors de ce TP nous avons couplés ces deux procédés.
I- La spectrométrie UV
1- Principe.
Une lumière polychromatique est envoyée à travers un prisme dans lequel cette dernière est décomposée. Ces différentes radiations monochromatiques sont envoyées sur notre échantillon.
La lumière d'intensité I0 passe à travers notre solution, une partie de celle-ci est absorbée par les solutés. L'intensité I de la lumière transmise est donc inférieure à I0.
Nous avons donc les relations suivantes :
A=log(I0/I)
A= εlC
Le spectrophotomètre est constitué de 2 emplacements pouvant accueillir 2 cuves l'une permettant de faire le blanc et l'autre contenant la solution à analyser.
Lors de ce TP, les cuves en polystyrène sont substituées par des cuves en quartz car le polystyrène a un domaine d'absorbance similaire aux composés à analyser. Nous avons d'abord analyser une solution de bichromate afin d'étalonner notre appareil.
Ensuite, nous utilisons l'UV pour déterminer la longueur d'onde d'absorbance maximale du groupement aromatique du toluène et des alkylbenzènes, qui est un chromophore.