Extraction et mise en évidence de la quantité de glycogène présent dans le foie
TP mis au point et présenté par Nadine MORANGE et Dominique GANTHEIL : Lycée L. Limosin
BUT :
On se propose de déterminer par la méthode colorimétrique de Beer-Lambert, la quantité de glycogène préalablement extraite d' un échantillon de foie le plus frais possible, plus l'abattage de l'animal sera récent, plus le résultat de la manipulation sera probant . MATÉRIEL NÉCESSAIRE :
Matière première|Appareillage|Verrerie|Réactifs|Matériel Exao|
Foie de veau ou de porc frais|Balance Broyeur électriqueTrompe à videPassoire|Buchner + filtres Fiole à videBêcherÉprouvettePipette|Eau iodée Alcool à 95HCl concentréeGlycogène|Color 4 (Jeulin) Cuves colorimétriquesLogiciel Enzymo| MANIPULATION :
La manipulation se déroule en deux temps, il faut en premier lieu extraire le glycogène du foie puis dans un deuxième temps réaliser le dosage de l'échantillon obtenu par rapport à une gamme étalon en utilisant la méthode de Beer-Lambert .
Extraction du glycogène :
· Peser et couper en petits morceaux 10 g de foie frais
· Faire bouillir le foie dans 100 ml d'eau distillée pendant 2 minutes
· Égoutter à l'aide d'une passoire puis le broyer avec un mixeur
· Ajouter 50 ml d'eau distillée et faire bouillir 5 minutes
· Filtrer sous vide sur Buchner
· Précipiter le filtrat récupéré avec 5 gouttes d'HCl concentré, (si un précipité important se forme, filtrer à nouveau afin d'éliminer l'excès protéique).
· Traiter le filtrat récupéré par 4 fois son volume d'alcool à 95 puis filtrer sous vide
· Récupérer le filtre, le laisser égoutter puis reprendre celui-ci avec 5 ml d'eau distillée
· Tester la présence de glycogène en prenant 3 gouttes du liquide obtenu et rajouter une goutte d'eau iodée*, (on doit obtenir une couleur brun-acajou).
*Eau iodée : dissoudre 1 g d'iode dans 2 g d'iodure de potassium puis compléter à 100 ml avec de l'eau distillée
Dosage de l'échantillon suivant la méthode de