/analyschim/photons/tp_dosages_proteines_abs.odt JF Perrin maj nov 2011 page 1/3

Dosage des protéines totales d'un échantillon
3 basiques de laboratoire Les méthodes de dosage des protéines totales sont nombreuses et présentent chacune des caractéristiques différentes : sensibilité, interférents, réponse plus ou moins différente selon la composition en acides aminés .... Le choix d'une méthode dépend donc du contexte. Citons quelques méthodes : par l'intermédiaire du dosage de l'azote total protéique, par mesure de l'absorbance intrinsèque à 280 nm, par méthodes photométriques après mise en œuvre d'une réaction chimique ou de la fixation d'un colorant ... Dans la suite, on se propose de doser des échantillons protéiques selon 3 méthodes : absorbance intrinsèque à 280 nm, photométrie à 540 nm après réaction du biuret, photométrie à 562 nm après réaction au Cu(II) et révélation à l'acide bicinchoninique (méthode dite au BCA) 1. Dosage des protéines totales par mesure d'absorbance à 280 nm La méthode est décrite dans le document annexe n°2. Réaliser le spectre de la sérumalbumine bovine en solution en NaCl 0,15M entre 230 et 350 nm. Commenter le spectre. Calculer le rapport A280/A260. Estimer, si cela vous paraît possible, les protéines totales de l'extrait « EBcoli », de l'extrait « PhoAcoli » et de l'extrait « Tyrosinase-lamelles » fournis par mesures d'absorbances à 280 nm. 2. Dosage des protéines par méthode du biuret La méthode est décrite dans le document annexe n°2. Adapter la méthode en microplaque 96 puits en utilisant les données du document n°2 et du tableau cidessous à compléter. Mesurer les protéines totales de l'extrait « EBcoli », de l'extrait « PhoAcoli » et de l'extrait « Tyrosinase-lamelles » (volumes d'essai à 50µL, prévoir un témoin de compensation échantillon pour l'essai « Tyrosinase-lamelles »).
TR Etalon SAB 5mg/mL en NaCl 0,15 M NaCl 0,15 M Réactif de Gornall Protéines par tube réactionnel (q en µg) 0 200 µL 0 1 2 3 4 5

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