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TP Enzymo

1531 mots 7 pages
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TRAVAUX PRATIQUES D’ENZYMOLOGIE
Ces 12h de Travaux Pratiques sont organisés en 2 parties de 6h composées toutes les 2 de la façon suivante :
Séance 1 en Salle de Travaux Pratiques 4h (Dernier étage du bâtiment Norbert Grelet)
Lors de cette séance, vous réaliserez les manipulations expérimentales qui vous permettront d’obtenir les données voulues
Séance 2 en salle d’informatique 2h (Salle à déterminer)
Cette séance sera dédiée à l’analyse par tableur (type Excel) des données obtenues lors …afficher plus de contenu…

Schéma 2
2- Influence de la température - partie expérimentale Une description détaillée de l’expérience et de son analyse se trouve dans votre cours.
Pensez à le relire avant de venir en TP ! Dans un premier temps, préparez 7 tubes selon les indications suivantes :
Dans chacun de ces tubes, mettez 0,1 mL de substrat et ajoutez 0,8 mL de tampon citrate phosphate de sodium pH 4,8 (tubes n°1 à 7).
Dans 7 autres tubes, mettez dans chacun de ceux-ci 0,1 mL de substrat et 0,9 mL de tampon citrate phosphate de sodium pH 4,8 (tubes témoins n°8 à 14). Dans un deuxième temps, placez les 14 tubes dans un bain marie à la bonne …afficher plus de contenu…

Au temps t = 20 min, introduisez dans chacun des tubes 0,5 mL de Na2CO3 1 M.
Pour chacun des tubes, déposez 200 µL par puits d’une plaque de microtitrage en triplicat.
Lisez les absorbances à 405 nm. Calculs préalables à faire lors de la séance :
- calculer pour chaque tube la concentration finale en substrat
- déterminer la relation entre la vitesse initiale v0 (exprimée en nmol/min) et A405 Lors de la seconde séance – en salle informatique, vous devrez tracer les courbes ci-dessous en utilisant :
- les consignes données par l’enseignant lors de la séance,
- Le fichier modèle excel disponible sur Celene
- ainsi que la fiche « mémo » pour utiliser Excel (disponible également sur Celene).
3- Influence de la température - Analyse des

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