Etude des récepteurs par la méthode de liaison et compétition

Exercice 1 L’objectif de cette étude est de déterminer si oui ou non deux substances pharmacologiques se lient de façon spécifique aux récepteurs des opioïdes. Ces substances sont la diprénorphine et la bremazocine. Les auteurs ont donc fait des études de «binding » en utilisant les dérivés tritiés de la diprénorphine et de la bremazocine. Pour étudier la liaison non spécifique, ils ont utilisés la naloxone (10µM). 1) Expliquer brièvement les différentes étapes expérimentales qui ont conduit à ces résultats. La première étape consiste à mettre en présence une matrice (noyau + cytosol ou membrane plasmique) avec des concentrations croissantes du ligand radioactif. Chaque tube est filtré et ce dernier est déposé dans un compteur de radioactivité. Ceci permet de déterminer la liaison totale. Pour obtenir la liaison spécifique, il est nécessaire de quantifier la liaison non spécifique. Pour se faire, on refait la même expérience que précédemment en ajoutant dans chaque tube une concentration de ligand froid 1000x supérieure à celle du ligand chaud. Cette expérience a pour objectif de déplacer la liaison spécifique et de ne conserver que la liaison non spécifique. 2) Déterminer le Kd, le Bmax ainsi que l’affinité de chacune des substances. Deux possibilités pour déterminer ces paramètres Pour la diprénorphine - La courbe de saturation (pas efficace car la courbe ne sature pas)

350 300 250 200 150 100 50 0 0 2 4 6 8 10 Liaison totale Liaison non spécifique liaison spécifique

-

La représentation de Scatchard (vous avez le ligand libre donc faîtes immédiatement cette représentation)

B/F
1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 0 70 60 50 40 30 20 10 0 0 50 100 150 200 250 300 Série1 Linéaire (Série1) y = -0,394x + 114,9 R² = 0,827 50 100 150 B/F Linéaire (B/F) y = -10,30x + 1538, R² = 0,890

Cette représentation (2 droites au lieu d’une) met en évidence que la brémazocine présente deux affinités