Tp bio 03
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Titrage de caséines et calcul du nombre de tyrosines présentent dans le lait.Résumé:
On utilise du lait (20ml) auquel on ajoute de l'acide acétique ( 0,2mol/l), puis on recupère le précipité par centrifugation. on procede ensuite à deux lavages avec de l'éthanol à 70% puis à 95% et on recupère le culot.Après séchage on effectue une pesée du culot ou l'on obtient 0,61g/20ml de (soit 31g/l) résultat ne concordant pas avec celui attendu de 28g/l de caséine.On en déduit donc la présence d'autres molécules précipités en meme temps que la caséine.
Abréviations pHi: pH isoéléctrique aa: acide aminé
Introduction Les protéines sont un élément essentiel du monde du vivant. On en retrouve en particulier dans le lait ou la nourriture. Afin de pouvoir étudier ces protéines et en analyser certaines propriétées il est nessecaire de les isolés des autres constituants.Nous allons nous interesser à une protéine particulière et largement présente dans le lait: la caséine (80% de la masse protéique).
Pour extraire cette protéine nous allons nous basé sur les propriétés électriques des molécules et donc des acides aminés, et nous chercherons à atteindre le point isoéléctrique de la caséine.
(cf. Partie 1- Précipitation des caséines)
En effet, à un certain ph ,une molécule donnée devient électriquement neutre (point isoélectrique), or le but de cette manipulation étant d'établir un titrage de tyrosine contenue dans la caséine du lait dont on sait que pHi=4,6 l'ajout d'acide acétique permet d'atteindre ce niveau de pH, permettant la précipitation des molécules de caséine qui sont devenue électriquement neutre.Une fois extraite et purifiée on va quantifier le nombre de caséine par pesé du culot sec obtenu. nous allons ensuite quantifier la concentration en caséine à partir du dosage des tyrosines d'une solution de caséine purifiées et hydrolysées que l'on trouve dans le commerce;
Pour quantifiés la concentration en protéine d'une solution