TP BIO Moleculaire
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Tp Biologie MoleculaireDans cette experience, il s’agit de faire évoluer des bactéries E.Coli dans différent milieux et d’observé leur courbes de croissances. Cette croissance sera étudiée sur le temps, de plus nous ferons varié la température du/des milieux. Nos bactéries se développerons dans deux types de milieux différents (LB, avec ou sans ajout de NaCl) chacun porté a deux type de températures différentes (30° ou 37°).
On obtient donc 4 milieux :
LB ; 30°
LB+NaCl ; 30°
LB ; 37°
LB+NaCl ; 37°
Les différents milieux sont contenus dans des erlenmeyers. Un de nos outils principaux lors de ce TP sera le spectrophotomètre qui nous permettra de calculer la DO (densité optique) d’un échantillons de notre milieux à un temps T donné
Ainsi on commence par ensemencer nos précultures en fonction du type de milieux donné à l’aide d’une pipette (il s’agira ici de prendre un volume de bactéries bien précis). Dans certain cas l’ajout de NaCl est nécessaire avant la transposition des bactéries dans le milieu donné. Il s’agit ensuite d’homogénéisé le tout par agitation.
La seconde étape consiste a mesuré la DO de notre culture a l’aide de notre spectrophotomètre qui aura été au préalable étalonné avec un échantillon de bactéries (un échantillon correspond ici a 1mL). Ainsi on reporte les mesures affiché par le spectrophotomètre dans un tableau.
Dans la troisième étape nous devons placer nos cultures dans un « bain-marie » pendant environ 20 minutes. En effet nous laisserons notre culture se développer a une température bien précise. Passé ces 20 minutes, il faudra de nouveau mesuré la DO d’un échantillon et placer à nouveau notre culture au bain marie. Il s’agira de répéter cette étapes plusieurs fois et de systématiquement reporté les mesures dans notre tableau.