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Tp biotechnologie

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Biotechnologies animales et végétale SLO6-BC01

Biotechnologie végétale – TP
Objectif du TP : Réalisation de différentes étapes dans le processus de la transgénèse végétale : introduction d’ADN dans l’agrobacteries, coculture pour transformation végétale et test d’activité enzymatique pour visualiser le présence du transgene.Le peuplier étant un modèle d’étude au laboratoire, il à été choisi comme organisme recepteur, l’agrobacterium tuméfaciens comme vecteur et le gène GUS comme transgène Jour 1 Diamètre de stérilité : 30cm Matériel nécessaire pour la conjugaison triparentale    Souche donneur Souche receveur Souche helper PTI désarmé Vecteur binaire Pmp90

A.tumefaciens(C28) Le peuplier  France leader (région centre)  Solides et résistants et légers Avantages        Intérêt niveau économique Bois de chauffe Papier 5% Cajette, cure dents, boites de fromages Bon outils de biologie moléculaire : plantes model, arabidopsis taliana Plante qui se transforme bien par agrobacterium tumefaciens Bon outil de recherche dans le monde végétal

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Biotechnologies animales et végétale SLO6-BC01

Carte de l’ADN-T du plasmide pKY70GIN ADN-T  Porte par le plasmide pKY70GIN LB  Bordure gauche Le promoteur 70S (double 35S : augmente l’expression), c’est un promoteur de virus (CAMV)  Fort  Constitutif  Ubiquitaire Le gène GUS : gène rapporteur     Permet de visualisé son expression par coloration C’est notre gène d’intérêt L’intron GUS est artificiel, il a été introduit dans le gène Son rôle est de s’assuré que dans un contexte eucaryote, la protéine exprimé est fonctionnelle (Ceci pourrait être important pour des problèmes de contamination : s’assurer que si l’on a une coloration, elle est due à l’expression du végétale et non de la bactérie).  Arrête la transcription d’un gène Le terminateur Tnos  Terminateur de la nopaline synthase (famille des opines : métabolite du plasmide) nptII  Néomycine phosphotranferase : gène de résistance à la

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