TP de Microbiologie Générale
(MBG)

Université de Nice Sophia-Antipolis, Faculté des Sciences, LSV2

Travaux Pratiques de Microbiologie Générale
MGG, LSV2

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TRAVAUX PRATIQUES J0 (TP1)
Conseils généraux
*Le port de la blouse est obligatoire
* Apporter une pince fine et un marqueur permanent (pointe fine)
* Travailler dans des conditions d’asepsie près de la source de chaleur et en reproduisant les gestes du démonstrateur. Par exemple : comment tenir le tube, le bouchon, la pipette ou l'anse de platine utilisée pour l'ensemencement. * Repérer les boîtes de chaque binôme à l'aide de vos initiales sur le fond de la boîte.
A- Croissance d'Escherichia coli en milieu liquide
a) Etude cinétique de la croissance bactérienne
Il s'agit d'étudier la croissance d'E. coli dans différentes conditions, en milieu liquide non renouvelé. Une suspension d'E. coli, souche DH5α, obtenue par culture dans du LB durant une nuit à 37°C (culture mère) est fournie à chaque groupe. Trois conditions de culture seront comparées : tube : milieu riche LB

tube

: milieu riche LB + NaCl 0,4 M (à préparer)

tube

: milieu minimum M63 (à compléter avec du Glucose, du MgSO4 et de la thiamine)

Chaque tube contient 4 mL de milieu.
1) A t = 0, inoculer à 2% chaque tube, agiter (vortex) et mesurer la DO600 nm
2) Placer les tubes sous agitation à 37°C.
3) Toutes les 30 minutes, mesurer la DO600 nm (les tubes sont vortexés puis introduits dans le spectrophotomètre). Attention, le zéro optique de l'appareil sera effectué par les enseignants avec le milieu correspondant sur les spectrophotomètres.
Résultats
Tracer les trois courbes de croissance (DO = f (t)) sur papier semi-logarithmique
Déterminer les paramètres de la croissance. Conclure.

b) Numération bactérienne
Pour connaître le nombre de bactéries de la culture, on procède à l'étalement sur milieu gélosé LB de la suspension. On ne peut pas compter plus de quelques centaines de colonies : il faut donc