Amorce

pathogènes (à ADN ou à ARN) - Diagnostics préimplantatoire et prénatal - Etude de l’expression des gènes - Détection de mutations - Agroalimentaire (OGM) Etude d’un cycle de PCR 1. Dénaturation de l’ADN cible 2. Hybridation des amorces 3. Extension des amorces - Ces 3 étapes se font à des températures différentes. - La PCR consiste à répéter ce cycle de 3 étapes thermiques dans un même tube. Les 2 brins de l’ADN sont maintenus appariés par des liaisons non covalentes : G≡C et A=T. La

complémentaires des séquences sont créées en utilisant des enzymes spéciales : les « amorces ». Elles identifient le début et la fin du processus de copie. Par exemple, si l’on veut copier un brin d'ADN qui est long de 20 nucléotides mais que l’on ne désire que la séquence entre les numéros 3 et 7 ; les séquences des nucléotides jusqu'au 3 et après le 7 sont identifiées et ensuite deux segments complémentaires de ces séquences, les amorces, sont formés avant que la réaction de polymérisation en chaîne ne commence

Matières Introduction Développement 1. Principe de la PCR 1.1 La technique de la PCR 1.2 Les acteurs de la PCR 2. Les différentes étapes de la PCR 2.1 Le contexte 2,2 Dénaturation 2.3 Hybridation 2.3.1 Les Caractéristiques des amorces  2.4 Elongation 2.5 Apres le premier cycle 3. Cinétique mesurable d'une PCR 4. Techniques associées à la PCR Conclusion Lexique Bibliographie Introduction ‘PCR’ est l’abréviation anglaise signifiant ‘Réaction de Polymérisation

5' Séquence identique à la séquence 5-3' 5' 3' Séquence cible Amorce droite (antisens) 3' 3' Amorce gauche (sens) 3' 5' complément inverse de la séquence 5'-3' 5' Les amorces doivent être spécifiques, stables* et compatibles. La longueur de l’amorce influe sur la température de fusion (Tm), la température d’hybridation (Ta) et la spécificité. Spécificité et Tm augmentent avec la longueur .En général on crée des amorces de 18-30 nucléotides. La composition en bases de l’amorce influe sur

établis à partir des rapports obtenus avec l’ADN des témoins normaux. Les patients présentant un rapport tangent entre deux intervalles sont re-testés. b) Choix des amorces Huit des neuf exons du gène NLRP3 et deux gènes de référence (pour cette étude DMD et GFAP) sont amplifiés par PCR multiplexe. Pour rechercher les amorces optimales pour cette amplification, nous avons utilisé le logiciel : primer 3 plus (http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi). En lui soumettant

de température est caractérisé par une réaction chimique distincte. Elle exploite le principe de réplication et fait donc appel aux capacités de l’ADN polymérase à synthétiser de brins complémentaire d’ADN à partir d’une matrice. L’hybridation des amorces initie le processus et l’ADN polymérase réplique le monobrin de l’ADN dans le sens 5’ vers 3’. · Utilité de la techniqueL’intérêt de cette technique se révèle dans son utilité dans plusieurs domaines et pour plusieurs buts

continu; • commande de puissance (chauffage, ...) ; • etc. 2. Composant utilisé. Le thyristor G TH Symbole : i A K vAK Un thyristor peut être considéré comme une diode comportant une électrode de commande G (gâchette). Pour être amorcé, le thyristor doit recevoir une impulsion sur la gâchette alors que la tension vAK est positive. Un thyristor se bloque naturellement lorsque le courant qui le traverse s’annule. On peut également le bloquer en lui appliquant une tension vAK négative

équivalent à un interrupteur unidirectionnel commandé à la | | |fermeture. | |Symbole |Pour amorcer un thyristor |[pic] | | |Il faut : | | |[pic]

R( i1-i2) = 2.R.i1 donc i1 = u12 /2.R Ceci n'est possible que si i1 > 0 donc u12 > 0; sur l'intervalle 0 ( θ ( 360°, cette inégalité est vérifiée pour 0 ( θ ( 150°. C'est la seule combinaison possible avec deux thyristors passants puisque Th3' est amorcé 60° après Th1. ϖ     Envisageons le cas où Th1, Th2' et Th3 conduisent ; dans ce cas la charge est directement connectée au réseau triphasé et v'n = vn = R.in pour n = 1, 2 et 3. Nous devons avoir simultanément v1 > 0 , v2 < 0 et v3 > 0. Ceci impose

l’extrémité 3’. Elle reconnait cette séquence mais aussi des petites séquences d’ARN que l’on appel AMORCES, il faut deux amorces car il y a deux chaines à synthétiser. Ces amorces vont servir de point d’appui pour l’ADN polymérase, ces amorces doivent être complémentaire ….. Ces amorces sont de l’ARN, elles sont synthétisé par une enzyme que l’on appel ARNprimase. L’ADN polymérase prend appui sur cette amorce et elle va commencer à synthétiser le nouvel ….. On va ouvrir le complexe d’ADN Schéma