Amorce

Génération de plantes transgéniques ……………………… A. Clonage du gène ATPIF7 dans un vecteur binaire …………… 1. Amplification de l’ADN du gène ATPIF7 …………………. i. Dénaturation ………………………………………………………………. ii. Hybridation ou d’appariement des amorces ……………………………… iii. Élongation ……………………………………………………………… 2. Digestion et Ligature de l’insert (ADN PIF7) ……………………………. a) Digestion ……………………………………………………………… b) Purification ……………………………………………………………… c) Ligature ………………………………………………………………

: Ve= VAK+ Vs. • Ve(t)>0 ⇒ VAK>0 : le thyristor peut être amorcé. - si iG = 0A : TH reste bloqué ( i =0 ) : VAK = Ve et Vs = 0. Mr BENGMAIH -1- Redressement monophasé commandé C.P.G.E-TSI-SAFI Si une impulsion de courant iG suffisante apparaît sur sa gâchette alors TH devient Ve passant et VAK =0, Vs = Ve et iD = . R • Ve(t) =0 ⇒ i =0A : le thyristor se bloque naturellement. • Ve(t) < 0 ⇒ VAK>0 : le thyristor ne peut pas être amorcé. Il est bloqué même si une impulsion de courant apparaît sur

stratégies peuvent être envisagées : * Transcription inverse en utilisant l’oligonucléotide qui sera utilisé lors de l’amplification (celui qui s’hybride à l’extrémité 3’ du messager) comme amorce pour la transcriptase. * Transcription inverse de tous les messagers en utilisant de l’oligo-dT comme amorce qui reconnaît les ARN messagers grâce à leur queue poly A en 3’ qui est spécifique. coiffe ARNm – A A A A A A A A T T T T reverse transcriptase

même tube. Il s'agit : - du fragment d'ADN à amplifier, - des amorces (ou oligonucléotides), dont la séquence est complémentaire à celle des extrémités du fragment d’ADN de manière à pouvoir s’hybrider avec elles. - de l'ADN polymérase (ici Taq polymérase) - du mélange des quatre nucléotides constitutifs de l'ADN. Tous sont ajoutés en large excès par rapport à l'ADN. Le choix des amorces est très important car ce sont elles qui vont délimiter le début et la fin de

cycle de PCR est constitué́ de trois étapes : une dénaturation de l'ADN par chauffage à 95°C pour séparer les deux brins, une hybridation des amorces aux extrémités de la séquence recherchée, puis une élongation des brins d’ADN grâce à l'action d'une ADN polymérase : la Taq polymérase à partir des deux amorces. Ce cycle est répété un grand nombre de fois (30 fois) pour obtenir une multiplication exponentielle de la séquence d'ADN cible

Répartiteur général Sur le plan pratique et par constatation, le répartiteur général est composé essentiellement de deux parties principales : Réglettes horizontales: Chaque tête de raccordement contient 16 amorces et chaque amorce contient à son tour 7paires. Chaque paire est protégée par un module de protection. Chaque paire de fils dans une tête de raccordement est repérée par une adresse définie par le numéro de tête, le numéro d’amorce et le numéro de paire

dernière est généralement comprise entre 50°c et 60°c et elle est fonction de la composition en désoxyribonucléotides des amorces. Les amorces reconnaissent et se fixe à leurs séquences complémentaires en reformant des liaisons hydrogène. On dit que les amorces s’hybrident au brin d’ADN. L’élongation : Une ADN polymérase (la Taq polymérase étant la plus utilisée) allonge les amorces en y incorporant les désoxyribonucléotides complémentaires de la séquence de la matrice auquel elle est hybridée. La

l'Élongation. On utilise 2 amorces de 16 nucléotides minimum qui reconnaissant la séquence d’intérêt à amplifier. L’une des amorce est analogue au brin 5’-3’ (Amorce F) tandis que l’autre est analogue est brin 5’-3’ mais lue à l’envers (Amorce R). L’amplification se fait en répétant 30 à 40 fois ce cycle.Figure 2 : Principe de la  PCR (observation sur l’ADN)Etapes de la PCRIn VivoIn VitroDénaturationHélicase (sépare les 2 brins)94°CHybridationAmorces (fixation de l’ADN pol)Amorces à 58°CElongationEnzymes

Introduction (2 parties) Amorce : sert à amener le sujet Problème traite : sert à montrer que le sujet est compris (7-8 lignes) Amorce : il faut donner un raison de poser la question qui est traité (3 parties) évènement Problème Déclaration Problème traité : pourquoi ce sujet est un problème ? Mettre en évidence le problème (pourquoi la réponse ne peut pas être simple) Problématique Quelques rappels : cibler le sujet ne pas argumenter dans l’introduction Attention à l’ordre amorce/problématique

re-spiraliser). #2 : Deuxième enzyme (Primase) synthétise une amorce d’ARN. #3 : Une fois l’amorce terminée, l’ADN Polymérase 3 se fixe et ajoute des nucléotides d’ADN. (Se fait de l’extrémité 5’ vers 3’ du nouveau brin). #4 : Enzyme (Primase) synthétise une amorce d’ADN. #5 : ADN polymérase 3 s’accroche à cette amorce et ajoute des nucléotides d’ADN. #6 : Plus première enzyme (Hélicase) dé-spiralise, plus Primase synthétise des amorces et ADN polymérase 3 va ajouter des nucléotides. (Pour le premier