Clonage Séquence Adn Vecteur Pbs

CLONAGE VOLATIANA RAKOTOARIVELO STEPHANIE TORRENTERAS RESUME Le clonage est l’exploitation provoquée d’un fragment d’ADN d’intérêt. L’étude se porte surtout sur les manipulations qui aboutissent a l’obtention des clones de ce fragment .Une digestion de l’ADN du bactériophage lambda et du plasmide (pBluescript) s’est faite par des enzymes de restriction au début de l’expérience afin d’obtenir plusieurs fragments à bouts cohésifs. Une ligation est réalisée entre les fragments afin d’obtenir des

Principe : Il est organisé autour de  SNAP, une protéine soluble de Dictyostelium discoideum qui a été étudiée en TD de bioinformatique. On veut faire l’expression du fragment cytoplasmique avec une étiquette His6 dans un vecteur pQE30. Diverses techniques nécessaires au sous-clonage seront abordées : PCR, digestion par des enzymes de restriction, séparation de fragments d’ADN sur gel d’agarose, culture de bactéries. La  SNAP sera purifiée par chromatographie d’affinité et analysée sur gel d’acrylamide

présence du transgene.Le peuplier étant un modèle d’étude au laboratoire, il à été choisi comme organisme recepteur, l’agrobacterium tuméfaciens comme vecteur et le gène GUS comme transgène Jour 1 Diamètre de stérilité : 30cm Matériel nécessaire pour la conjugaison triparentale    Souche donneur Souche receveur Souche helper PTI désarmé Vecteur binaire Pmp90 A.tumefaciens(C28) Le peuplier  France leader (région centre)  Solides et résistants et légers Avantages        Intérêt niveau

vous êtes les auteurs !!! Il reprend les principales parties d’un article scientifique : Titre ; Auteurs ; Introduction (problématique générale et objectifs des 4 TPs); Matériels et Méthodes (schéma général présentant la démarche expérimentale ; séquences des amorces, tailles des amplifiats); Résultats (présentation et analyse de vos résultats, toutes les photos et figures doivent être légendées et expliquées !); Discussion (validité de vos résultats expérimentaux ; problèmes éventuels d’expérimentation

Résumé Introduction: Le clonage, apparu dans notre société voilà 50 ans, est très présent dans l'actualité, souvent présenté par les médias sous un aspect négatif, et donnant lieu à de nombreuses polémiques. La notion de clonage recouvre un ensemble de techniques permettant d'obtenir la réplication à l'identique d'une cellule ou d'un organisme. La population obtenue est constituée de cellules ou d'organismes possédant tous le même patrimoine génétique, cet population forme un clone . Dès le

réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction du plasmide pGEX-IDH : L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur pGEX-2T présente déjà deux sites de coupure par les endonucléases à bouts cohésifs 5’ sortants BamHI et EcoRI juste en aval du gène codant pour la GST, protéine d’~ 26 KDa. Ces sites protéolytiques BamHI et

réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment IDH dans le plasmide pGEX-2T a nécessité que l’insert IDH et le vecteur soient clivés par les mêmes enzymes de restriction (ou compatibles). Le vecteur pGEX-2T présente déjà deux sites de coupure par les endonucléases à bouts cohésifs 5’ sortants BamHI et EcoRI juste en aval du gène codant pour la GST, protéine d’~ 26 KDa. Ces sites protéolytiques BamHI et

-Tab1- protéines utilisées en industrie -Tab2 Création des O* (Vg*, A*, µO*) ayant des caractéristiques modifiées I- EXPRESSION DES PROTEINES RECOMBINANTES  Nécessite l’utilisation de vecteurs spécialisés = vecteurs d’expression (séquences d’ADN signaux qui gouvernent la transcription et la traduction de la séquence par la ¢ hôte)  Les ¢ hôtes (B*, levures, ¢ Vg*, ¢ A*)  La technologie de l’ADN recombinant permet de produire des formes variantes de protéines naturelles. On parle du génie de protéines

amplifiée. Ce clonage a été réalisé par transformation bactérienne à partir de plasmide Blue Script et de phage lambda digérés par des enzymes de restriction. A l'issue de cette manipulation ont été obtenus des plasmides transformés et recombinés. II/ Introduction Le but du clonage est de produire de grandes quantités d'ADN à partir d'un fragment donné. Ainsi une petite quantité d'une molécule (comme par exemple l'insuline) va pouvoir être produite en grande quantité. Le clonage représente

............................... 50 D. Préparation d’ADN plasmidique........................................................................ 50 E. Digestion enzymatique de l’ADN et purification de fragments......................... 51 F. Ligation vecteur-insert ....................................................................................... 52 G. Marquage de sondes nucléiques à la digoxygénine (DIG)................................. 52 H. Détection d’ADN par hybridation de type Southern....