Gel

coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par digestion, en fonction de leurs charges (application d’un champ électrique) mais surtout en fonction de leurs tailles (agarose).Le gène wzc est ainsi purifié.

protéines dans un gel, par exemple d’agarose, qui est constitué d’une matrice polymère (agarose et polyacrylamide) qui baigne dans un tampon conducteur (solution qui maintient à peu près le même pH malgré l’addition de petites quantités d’acide ou de base). L’agarose sert à séparer de l’ADN ou de l’ARN alors que le polyacrylamide permet de séparer des molécules plus petites comme des fragments d’acides nucléiques ou des protéines. Puis on applique une tension aux extrémités de ce gel et ainsi les protéines

hydrolyse de l'ADN par une enzyme de restriction. Cette enzyme de restriction permet de couper un fragment d’ADN. Ensuite pour pouvoir séparer ces fragment de restriction il faut les séparer par électrophorèse sur gel d'agarose : cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose ; les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieures. [pic] [pic] Agarose : Macromolécule à base d'agar

donc aussi se multiplier. Des cultures de bactéries sont faisables, ce qui va donner des centaines de milliers d'exemplaires du plasmide. C'est le principe du clonage. Résultats: A la suite de notre premier clonage une première électrophorèse sur gel d'agarose a été réalisé. En parallèle de la migration des fragments d'adn, un marqueur et introduit dans électrophorèse afin de déterminer la taille des fragments obtenus à l'issue de la digestion. Pour le plasmide on retrouve les taches a la bonnes

produits d’amplification Préparation du gel d’agarose et electrophorèse : L'électrophorèse en gel d'agarose est une méthode utilisée en biochimie et en biologie moléculaire pour séparer l'ADN, l'ARN ou des protéines en fonction de leur poids moléculaire.La technique de l'électrophorèse en gel d'agarose est basée sur la séparation des acides nucléiques chargés négativement sous l'effet d'un champ électrique. Cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose : les molécules de plus petites

l’ADN à séquencer. • La fixation des ddNTP aux brins d’ADN va créer des brins de différentes tailles. • Les brins vont migrer sur un gel d’électrophorèse selon leur taille : le plus petit migre le plus vite. Lecture de la séquence - Séquençage « à la main » - Électrophorèse sur gel d'acrylamide. - Détection des fragments d'ADN, en exposant un film photographique au gel. Un des dNTP est marqué au 35S, rendant le fragment radioactif Suivant la taille des gels la séquence lue est limitée de 200 à 750

2nd F Électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose Introduction Les multiples applications scientifiques et technologiques impliquant l'étude de l'ADN font appel à différentes techniques. Parmi elles, l’électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille, préalable indispensable dans de multiples applications, notamment pour identifier des fragments d’ADN découpés par des enzymes, pour identifier

réaction en suivant le protocole et ceux-ci ont été placés pour 45 minutes à 37°C dans le bloc chauffant. SOP-BIO-5 – Électrophorèse d’ADN sur un gel d’agarose. (Les fragments PCR et digestions d’endonucléases) Quelques changements ont été apportés. Nous avons utilisé une source de tension réglée à 130V pour accélérer le processus de migration de l’ADN dans le gel pendant un total de 47min. Le reste des manipulations a été effectué conformément aux indications du protocole. Résultats Les résultats obtenus

est prioritaire, récessif ; caractère qui ne s'exprime pas. Nous devrons donc savoir si le gène DMD (gène responsable de la dystrophie musculaire de Duchenne) est dominant et récessif afin de déterminer si c'est héréditaire. L'électrophorèse par gel permet de séprarer en plusieurs niveaux des brins d'ADN afin de mieux pouvoir les observer. Nous allons également introduire la notion de myopathie de Duchenne (ou DMD pour dystrophie musculaire de Duchenne). La myopathie de Duchenne est une maladie

permettent au verre d’existé comme l’un des matériaux les plus courant dans notre vie alors qu’il fut crée il y a fort longtemps Ensuite, nous avons fait des recherches sur le futur du verre, notamment sur le procédé de fabrication « sol-gel » Travail personnel : La majeur partie du travail a été fait chacun de notre coté, nous nous sommes répartis la rédaction des différentes parties et les recherches selon ce que l’on avait chacun commencé pendant nos deux heures