2nd F
Électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose
Introduction
Les multiples applications scientifiques et technologiques impliquant l'étude de l'ADN font appel à différentes techniques. Parmi elles, l’électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille, préalable indispensable dans de multiples applications, notamment pour identifier des fragments d’ADN découpés par des enzymes, pour identifier un gène ou pour établir des empreintes génétiques par Southern Blot.
L’électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose ne présente guère de difficultés techniques et peut être utilisée aisément en travaux pratiques tant à l’université qu’au lycée pour familiariser les étudiants avec cette technique essentielle. En conjonction avec divers outils informatiques désormais communs (traitement de texte, tableur, logiciels d'acquisition et de traitement d’images), l’analyse des résultats peut conduire à des développements importants permettant de mieux comprendre l’intérêt tant scientifique que pratique des technologies de l’ADN. Différentes possibilités mettant à profit ces divers outils sont présentées ci-dessous.

* Mise en pratique de l’électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose. * Préparation du matériel : Gel d’agarose 1- Mélanger tampon TBE et agarose à raison de 0,8 g d'agarose pour 100 ml de tampon (la proportion d’agarose dépend de la taille des molécules d’ADN à séparer).
2- Faire fondre l'agarose au four à micro-ondes en surveillant pour éviter les projections ou au bain marie. Agiter de temps à autre pour homogénéiser le mélange.
3- Laisser refroidir jusqu'à ce qu’il devienne possible de saisir le flacon à main nue (environ 60 °C).
4- Placer les joints fournis avec la cuve pour fermer le support de gel et positionner le peigne à 1 mm du fond et à environ 1 cm de l’extrémité du support. Régler le niveau pour que le support de gel soit horizontal.