Restriction calorique

VECTEURS : PLASMIDES, PHAGES, COSMIDES, YAC, BAC, VIRUS 13 I- Les vecteurs en génie génétique : l'ADN plasmidique II- L'ADN phagique III. Cosmides, YAC et BAC 13 17 20 Chapitre III: ENZYME DE RESTRICTION, ÉLECTROPHORÈSE, CARTE DE RESTRICTION 24 I. Enzymes de restriction II. L’électrophorèse sur gel III. Les enzymes utiles en génie génétique: 24 30 31 CHAPITRE IV: CLONAGE ET ÉTUDE DE L’ADN CLONÉ. I - Le clonage II - Les banques génomiques III - Les banques de cADN

espérance de vie identique au reste de la population. Un dépistage génétique des familles à risque, fondé sur l’utilisation d’une enzyme de restriction, est donc nécessaire. Les enzymes de restriction coupent les séquences d’ADN en des sites composés de quelques bases et qui leur sont spécifiques, appelés sites de restriction. On cherche à identifier une enzyme de restriction permettant le dépistage de l’allèle muté chez un individu. Matériel : - logiciel ANAGENE et fiche technique d’ANAGENE - fichier ANAGENE

 Enzyme de restriction L'enzyme de restriction EcoRV (en vert) avec son substrat : l'ADN 1 Une enzyme de restriction est une protéine qui peut couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnaît ainsi un site spécifique. Plusieurs centaines d'enzymes de restriction sont actuellement connues, on en retrouve naturellement dans un grand nombre d'espèces de bactéries. Ces enzymes, naturellement

 TP de Biologie Moléculaire Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative Objectif L’objectif de ce TP est de préparer et d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’une souche d’E.coli pour établir une carte de restriction, puis de réaliser une électrophorèse en gel d’agarose afin d’isoler le fragment Eco RI/ Bam HI (wzc). Principe Préparation de l’ADN plasmidique La préparation de l’ADN plasmidique est réalisée à partir d’une souche d’E.coli cultivée à

les capacité des enzymes de restriction ( proteines capables de scinder l ' ADN ) pour étudier le clonage moléculaire grâce à l'outil informatique , c'est le clonage « In Sillico ». Table des matièresTable des matières 1) Les enzymes de restriction :1 a) Le plasmide1 b) Les Enzymes2 2) Digestion du plasmide à l'aide des 2 enzymes de restriction2 3) Digestion du phage Lambda3 4) Insertion d'un fragment de phage dans le vecteur4 1) Les enzymes de restriction :a) Le plasmideOn retrouve les

l'UV au moyen d'un spectrophotomètre. L’ADN extrait subit aussi divers traitement au cours de ce TP, en effet, on fait intervenir une enzyme de restriction. L’enzyme de restriction (Ecor1) est une protéine qui peut couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait ainsi un site spécifique. Egalement on fait agir une Dnase et une Rnase toujours sur cet ADN extrait. Et ces ADN extraits traités différemment

séquences courtes reconnues par des enzymes de restriction. Ces séquences permettent l'insertion d'un fragment d'ADN afin de le cloner. Un vecteur de clonage est une molécule de petite taille qui a la capacité de réaliser la réplication de façon indépendante afin d'isoler un fragment d'ADN, il en existe 3 (plasmide, cosmide, phage). De ce fait le plasmide est donc un excellent vecteur de clonage. Tout d'abord il faut digérer l'ADN avec des enzymes de restriction. On veut isoler un gène précis de la molécule

Miniprep purification de l’ADN plasmide à partir des bactéries transformées Aucune modification apportée au protocole. SOP EQP-4.2 : Lecteur de Microplaques avec TAKE3 pour le dosage d’ADN Aucune modification apportée au protocole. Cartes de restriction d’ADN et amplification d’ADN (PCR) Matériaux : 1 aliquot d’échantillon de l’ADN plasmide isolé au laboratoire 3 (miniprep) 1 aliquot de pGFP-actine de concentration connue (12ng/µL) 1 aliquot d’Econotaq 3 aliquots de 100µL 2x Taq-tampon-dNTP

informations sur les protocoles d’extraction / purification de l’ADN, cliquez sur http://www.john-libbey-eurotext.fr/articles/abc/57/1/77-84/ I.1.2. Les enzymes agissant sur les acides nucléiques Les enzymes de restriction Généralités Découvertes à partir de 1973. Les enzymes de restriction sont capables de reconnaître spécifiquement une courte séquence, de 4 à 10pb, et de cliver l'ADN au site reconnu. Ils permettent de fragmenter l'ADN en segments de taille réduite, ou de le couper à tel ou tel

qui a été étudiée en TD de bioinformatique. On veut faire l’expression du fragment cytoplasmique avec une étiquette His6 dans un vecteur pQE30. Diverses techniques nécessaires au sous-clonage seront abordées : PCR, digestion par des enzymes de restriction, séparation de fragments d’ADN sur gel d’agarose, culture de bactéries. La  SNAP sera purifiée par chromatographie d’affinité et analysée sur gel d’acrylamide par la méthode SDS-PAGE. Elle sera identifiée par des anticorps spécifiques (techniques