CRef biotechnologies – 2004/2005 – Séverine RENARD

Hydrolyse du saccharose : fiche prof

Deux notions sont à dégager :
Structure du saccharose
Notion d’enzyme : rôle, nature et propriétés
Mode opératoire :
1. Tube témoin :
Il ne se passe rien (coloration bleue due à la liqueur de Fehling)

Absence de glucides réducteurs
Le saccharose n’est pas un glucide réducteur
C’est le tube de référence, il va servir de comparaison avec les tubes suivants
2. Hydrolyse du saccharose :
2.1.
Précipité rouge brique

Présence de 1 ou plusieurs glucides réducteurs
Le saccharose a été transformé en glucide(s) réducteur(s) par l’invertase : il y a eu hydrolyse
2.2. Identification des produits d’hydrolyse
Par quelle technique peut-on identifier les produits d’hydrolyse?
Chromatographie
Méthode d’analyse qui sépare les constituants d’un mélange par entraînement à l’aide d’une phase mobile liquide le long d’une phase stationnaire solide qui porte les solutés à séparer.
La phase mobile migre par capillarité dans le support vers le haut : c’est donc une chromatographie ascendante.
Deux forces principales vont sur les molécules de solutés :
- force de migration due à la solubilité dans l’éluant
- force de rétention due à l’affinité pour la phase fixe
La résultante de ces 2 forces étant variable selon les solutés, ils migreront à des vitesses différentes.
Après révélation, apparaissent des tâches à partir desquelles il faut calculer les Rf
Rf = distance du point de dépôt au centre de la tâche / distance du point de dépôt au front du solvant
Voir feuille annexe pour les calculs

Quelles sont les différences entre hydrolyse chimique et enzymatique ?
100°C, H2SO4,
15 minutes

L’acide est le catalyseur chimique

C12H22O11 + H2O

C6H12O6 + C6H12O6
37°C, invertase,
2 minutes

ici le catalyseur est un extrait de matière vivante : c’est un catalyseur biochimique = enzyme

On remarque qu’une hydrolyse enzymatique demande moins d’énergie (temps et