Protocole chimie analytique

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Caféine dans le thé.

Pesez 5 grammes de l'échantillon (ci dessus) dans un erlenmeyer d'un litre. Ajoutez minutieusement 500 ml d'eau. Agiter et chauffer jusqu 'à ébullition. Ajouter 10 g de MgO lourd. Faire bouillir doucement au dessus d'une petite flamme 2 heures, remuer regulierement. Ajouter de l'eau pour eviter le moussage et pour laver les parties basses de la flasque.
Refroidir et et….. avec de l'eau.....
Filtrer, collecter 200 ml de filtrat clair ( equivalent a 0,4 du poids de l'echantillon)
Ajouter 20 ml de H2SO4 ( 1+9) et transférer dans une ampoule a décanter de 500ml.
Secouer 6 fois avec du CHCL3 en utilisant des portions de 25, 20, 15, 10, 10 et 10ml (agiter 6 fois en ajoutant respectivement entre chaque agitations 25, 20, 15, 10, 10 et 10 ml de CHCL3
…. Traiterl'extrait combiné avec 5 ml de solution de KOH a 1%.
Lorsque les liquides sont completement séparés, drainer la phase de CHCL3 ds une flasque kjeldahl. Laver la solution alcaline ds une ampoule a décanter avec deux portions de 10 ml de chcl3 et combiner les lavages et enlever le surplus d'extraits d'évaporation ou distiller le CHCL3 jusqu'à obtenir un volume inferieur a 25ml. Et procéder comme dsle 920.103 1ml 0,1 N d'H2SO4 = 4,85 mg de caféine anhydre.

Methodes de spectrophotométrie ultra violet et chromatographie gazeuse.

A Réctifs

(a)-Solution standard de cafeine : solution num 1 : 500µg/ml.
Peser précisement 100 mg de cafeine, USP ; la dissoudre et diluer ds une fiole jaugée de 200 ml et avec du CHCL3
-Solution num 2 : 10µg /ml. Pipeter 20 ml de la solution 1 ds une fiolejaugée de 100 ml et ajuster jusqu'au trait de jauge avec du chcl3 ; diluer 10 ml de cette solution ds 100 ml de CHCL3

(b)-Solution standard de pentobarbital interne : 2mg/ml.
Peser précisément 200 mg de pento. Le dissoudre et diluer avec de l'alcool ds une fiole jaugée de 100 ml.
-Solution standard de GC travaillant : 250µg de cafeine et &mg de pento/ml
Pipeter un volume egal de lasolution standard num 1 de la cafeine et de la solution standard de pento interne dans une fiole g-s et mixer energiquement.
Préparation quotidienne.

B Dispositif

(a) chromato gaseuse. Equipé d'un detecteur thermique ionique Kcl
Condition d'opération : colonne (190), détécteur (220), injecteur (220)
« N carrier gaz »
Injecter 5 micro litre de solution satndard de GC travaillant,enregistrer le chrmotogramme.
Ajuster l'aténuation et la sensibilité ( 1 fois 10 puissance -8 AFS) si necessaire apporter des pics a environ la moitié de la déviation. Ajuster le débit de N pour que la caffeine soit éluée en environ 7 minutes.
(b) chromatographie gazeuse sur colonne : « glass, 1,8m (6') x 4mm id packed with 10% de l'huile DC-200 ds 80 a 100 mailles de gaz Chrome Q ( science appliquée,préenrobé ou equivalent).
Condition pr la colonne : superieur a 24h a 250, 260 degrés ( avec un flux de N de 100 plus ou moins 20 Ml par minute).
© Enregistrements du spectrophotometre : un rang de 250-350 nm avec une cellule de 1cm qui correspond.
tube chromotographique : 25x 250 mm

C/ PREPARATION D'UN ECHANTILLON
(a) feuille de thé. Ecraser l'echantillon ds un mélangeur haute vitesseou ds un autre dispositif adapté pour pouvoir traverser le tami numéro 30 ou 40. Peser environ 1g de thé et les placer ds un becher de 100 ml. Ajouter environs 40 ml de nh4oh (1+2), et chauffer 5 min ds un bain de vapeur. Transferer la quantité ds une flasque de 100 ml, froide, et diluer jusqu »au trait de jauge avec le nh4oh (1+2). Transferer 5 ml de l'aliquot ds 6 g de Celite 545 (lavé al'acide) ds un becher de 100 ml et proceder comme ds le 979.11C
(b) thé instantané : placer 0,5 g de l'echantillon ds un becher de 100 ml et continuer comme ds le 979.11c .

D/ PREPARATION DES COLONNE ET DE LA SOLUTION D'ECHANTILLON
Preparer les colonnes comme ds le 979.11c (petit a) et (b). Isoler la caffeine comme ds le 979.11d , diluer jusqu 'a 50 ml et proceder comme ds le 969.15e.

E/...
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