TD BIOLOGIE MOLECULAIRE
Les étapes de la réplication
Eucaryotes Procaryotes
Déroulement de l’hélice d’ADN Topoisomérase type I et II
Hélicase
Hélicase
Synthèse des amorces ARN PrimaseADN pol ALPHA
Polymerase 5’-> 3’
Pas d’activité exonucléasiquePrimaseAllongement de l’ADN ADN pol DELTA
Polymérase 5’ -> 3’
Exonucléasique 3’ -> 5’
ADN pol III
Polymérase 5’ -> 3’
Activité exonucléase 3’ -> 5’
Destruction des amorces RNAse H ou FLAP endonucléase
ADN pol EPSILON même rôle que la DELTA
ADN pol BETA
Répare les erreurs
ADN pol I
Synthèse 5’ -> 3’
Activité exonucléase 5’ -> 3’
Peut don détruire les amorces
Ligation (ATP dépendant) ADN ligase
Rattache le 5’phosphate au 3’ OH
ADN ligase
Les ADN polymérases extraites de bactéries
THERMUS AQUATICUS PYROCOCUS FURIOSUS
Nom de l’ADN polymérase Taq polymérase Pfu polymérase
Température d’activité 70°-75°C 8 fois plus efficace à 100°C
Activité polymérase 5’ => 3’ 5’ => 3’
Activité exonucléase Aucune 3’ => 5’ capable de correction.
Taq polymérase = 35 à 100 nucléotides par secondes.
Les séquences de l’ADN
GENES
30% ADN REPETE
55% SEQUENCES INTERGENI-QUES NON REPETEES
25%
E
X
O
N
S
1% à 2% I
N
T
R
O
N
S
29% REPETE DISPERSE
47% REPETE GROUPE
8%
ADN TRANSPOSONS3%
Rétroéléments
44%
S
A
T
E
L
L
I
T
E
S M
I
N
I
S
A
T
E
L
L
I
T
E
S M
I
C
R
O
S
A
T
E
L
L
I
T
E
S
Rétrotransposons
8% Rétroposons
36% L
I
N
E
20% S
I
N
E
13% A
U
T
R
E
38% Les satellites sont des séquences en tandem répétées responsables du polymorphisme. A cause de l’ADN polymérase qui fait des erreurs = plein de répétitions.
Techniques d’analyse des Acides nucléiques
Extraction de l’ARN
Utilisation du TRIZOL pour l’extraction à partir de tissus, PHENOL/CHLOROFORME pour l’extraction à partir des liquides biologiques
Synthèse d’ADNc à partir de l’ARN
Utilisation d’une REVERSE TRANSCRIPTASE (ADN polymérase