Série ABB 3

Compte rendu de Biochimie
Purification et étude cinétique de la LDH

Année universitaire 2013/2014 DUT 1 Semestre 2

Sommaire

Introduction p.1

I / Principe de la séparation p.1 1) Méthodes p.1 a – Préparation de l’extrait brut b- Chromatographie d’affinité et d’exclusion
2) Résultats et discussion p.5 a – Chromatographie d’affinité b- Chromatographie d’exclusion
II / Etude des fractions purifiées p.7
1) Méthodes p.7 2) Résultats et discussion p.8 a – Détermination des concentrations en protéines b- Suivi de la purification
III / Electrophorèse p.11
1) Méthodes p.11
2) Résultats et discussion p.13
IV / Etude cinétique p.14
1) Méthodes p.14
2) Résultats et discussion p.15

Conclusion p.18
Introduction
La Lactate Déshydrogénase (LDH), est une enzyme importante dans la régulation du métabolisme chez l’Homme. On peut la trouver dans de nombreux endroits tels que les muscles, le foie et le cœur. Associée à des coenzymes (NADH+H+), elle permet la formation de lactate à partir du pyruvate et la production d’énergie en anaérobie. Cependant la LDH fonctionne aussi dans l’autre sens et permet la formation de pyruvate et la restitution de glucose à l’organisme (cycle de Cori et néoglucogenèse). Par ailleurs l’étude du taux de cette enzyme révèle parfois certaines pathologies et l’atteinte d’un organe. L’objectif de ce TP est de purifier la LDH et de la caractériser du point de vue biochimique (isoformes, activité spécifique, constantes cinétiques…). Pour cela nous verrons dans un premier temps le principe de la séparation par les différentes chromatographies puis nous détaillerons dans une deuxième partie la méthode d’étude des fractions purifiées. Enfin, après avoir expliqué le principe de l’électrophorèse, nous étudierons l’aspect cinétique de la LDH.

I / Principe