Loi de Beer-Lambert

primordial d’effectuer un blanc, c’est-à-dire d’ajuster le spectrophotomètre à 0 d’absorbance avec l’eau. Ainsi, lorsque l’instrument de mesure fonctionne, il ne prend en note que l’absorbance du composé chimique présent dans la solution. La loi de Beer-Lambert exprime que l’absorption est proportionnelle à la concentration du milieu qu’elle traverse, comme mentionner précédemment. Cependant, la concentration n’est pas proportionnelle à l’infini avec l’absorbance. En effet, cette relation est seulement

0,1 mmol.L-1 à partir de la solution S1 ?(1) 2°) La solution de sulfate de cuivre est bleue, proposer une longueur d'onde pour réaliser cette courbe d'étalonnage. Justifier la réponse. (1) 3°) Construire le graphe A = f(C). (1,5) 4°) La loi de Beer-Lambert est-elle vérifiée suite à la courbe obtenue ? Justifier. (1) 5°) A 20 mL de la solution de sulfate de cuivre à 5.10-3 mol.L-1, un élève joueur a ajouté un volume d'eau distillée sans le mesurer, pour obtenir la solution S2. L'absorbance de

~ A2 (Les détecteurs sont incohérents!) Absorption RX Absorption de RX (absorption photoélectrique) dz I0 I(z) z  dI  I  dz I ( z)  I0 e z Loi de Beer-Lambert Absorption RX µ fluorescence Réflexion et réfraction n c  , n  1    i   10 5  10 8 ,    c ? Loi de Snellius - Descartes n ~ 1.5 - 2 cos   n cos  '   C ,  '  0  C  2 Réflexion et réfraction Miroir RX focalisent   C • 100% réflectivité

nulle. Dans le tube T1, sans enzyme, il n’y a aucune libération de maltose et dans le tube T2 sans substrat l’enzyme n’agit pas. ▪ Cinétique enzymatique : L’absorbance mesurée rend compte de la concentration en Maltose formé (loi de Beer-Lambert A340 = l.ε). A partir des résultats obtenus des tubes 1 à 7, on trace la courbe A540 = f(t) fournie en annexe. La tangente à l’origine permet de déterminer la vitesse initiale Vo. ▪ Changement de milieu : Dans le tube 10, on a

concentrée plus elle absorbe la lumière dans les limites de proportionnalités énoncées par la loi de Beer-Lambert. La densité optique des solutions est déterminée par un spectrophotomètre préalablement étalonné sur la longueur d'onde d'absorption de l'espèce chimique à étudier. Il mesure la variation d'intensité de la lumière avant et après traversée de la cuve (Schéma ci-dessous) Relation de Beer-Lambert à une longueur d'onde λ: Aλ = ελ.l.c Avec:  Aλ est l’absorbance ou la densité optique

On ne voit que la partie ultraviolette du spectre donc on ne peut pas juger sur la couleur mais une espèce chimique n’absorbant que dans l’UV sera incolore. b) On trouve !max (4-aminophénol)= 230nm et !max (paracétamol)= 245nm ; D’après la loi de Beer-Lambert : soit pour le 4-aminophénol et pour le paracétamol : Nombre d’onde ! ( cm "1 ) à 2950 et à 1500 à 3200 et à 1590 à 1600 à 1650 ! 230 = ! 245 A= ! " # ! #C donc !" = A ! #C A 1,0 = = 1,5.10 5 L.mol #1 .m #1 #2 ! "C 1,0.10 " 6,6

concentration molaire en fonction de l'absorbance. III-Valider Grâce à cette courbe,on peut en déduire la concentration de la solution du bonbon.L'absorbance du bonbon est égale à 0,742.Ensuite on calcule la concentration avec la loi de Beer-Lambert,A=k x C avec k=2,34 x 105.On obtient: C=A/k=0,742/2,34x105=3,17x10-6. Ensuite,on cherche la masse de bleu de patenté contenue dans un bonbon.On a donc: m=c x V x M=3,17x10-6x50x10-3x582,66=0,0923 mg. On veut maintenant trouver la masse de

dilution : il consiste à prendre une solution initiale (contenant une concentration initiale et un volume initial) et de le diluer a l’aide de l’eau distille afin de modifier la solution qui contient une (concentration finale et un volume final). Loi de Beer –Lambert : c’est une équation qui met en relation une longueur d’onde, l’absorbance d’une solution qui est proportionnelle à sa concentration. Introduction Ce laboratoire permet d’analyser le phénomène de l’absorbance de plusieurs solutions. Ce

photoélectroniques (ou d’ionisation) b) Les spectroscopies électroniques : ultraviolet et visible c) Les spectroscopies vibrationnelles d) Les spectroscopies rotationnelles e) Les spectroscopies magnétiques ou de spin f) Spectrométrie de masse 4) LOI DE BEER-LAMBERT a) Démonstration et énoncé b) Additivité des absorbances c) Limites 5) SPECTROPHOTOMETRE a) Eléments constitutifs b) Un exemple : spectrophotomètre ultraviolet-visible c) Sources d) Transparence des supports 6) ALLURE DU SPECTRE page 8

longueur d'onde à laquelle la CF absorbe. On remarque que notre composé CF absorbe à 492nm. A partir de ce spectre d'absorption, nous avons pu déterminer deux paramètres sui sont : - le coefficient d'extinction molaire : Epsilon grâce à la loi de beer-lambert : A=Epsilon.l.C où A = 0.073 ; l = 1cm et C = 1mM -le pic d'absorption. -> Mesure du spectre d'émission au spectrofluorimètre: Le paramètre accessible est le pic d'émission à 515 nm. Pour réaliser ce spectre nous avons excité la molécule