Polyadénylation

Voici les 3 étapes de maturation i. -coiffage de l’extrémité 5’ (Chapeau) ii. -épissage de l’ARN iii. -polyadénylation de l’extrémité 3’ (queue) c. Le remaniement des 2 extrémités permet de vérifier si le message de la séquence est intact avant d’être traduit. d. Le coiffage et la polyadénylation sont des ajouts de nucléotides non codés par le génome e. Cette maturation permettra au transcrit primaire d’acquérir une structure finale

L’enzyme ARN polymérase forme des liaisons phosphodiester entre les nucléosides d’A… 6. Par complémentarité entre les nucléosides suivants et les nucléotides de l’ADN 7. La transcription s’arrête après la transmission d’un signal de polyadénylation 8. L’endonucléase hydrolyse le lien entre l’ARN … Maturation 1. La maturation a lieu dans le noyau 2. Les enzymes de la coiffe associent une coiffe GTP à l’une des extrémités de l’ARNpré-m 3. L’enzyme Poly-A polymérase ajoute

coiffe participe à l’initiation de la traduction et empêche la dégradation de l’ARN par une exonucléase 5’3’ (ce qui augmente sa demi-vie). b – L’extrémité 3’ polyadénylation Une queue polyA est ajoutée grâce à la polyA polymérase. Les seuls ARN échappant à cette maturation sont ceux codant pour les histones. La polyadénylation protège l'extrémité 3' de l'ARN des exonucléases. Cette queue polyA est une aubaine pour les biochimistes car elle est très utile pour séparer des ARNm d'autres

4- Transcription et traduction séparer dans l’espace et dans le temps. La région 3’ – 5’ non codantes sont transcrites mais pas traduites. Rôle de stabilité. Région 5’ non codante : initiation de la traduction Région 3’ non codante : polyadénylation Chez les procaryotes ARNm sont sous formes définitives. Pas de précurseurs N’ont ni coiffe, ni queue polyA Transcription-traduction sont couplées et s’effectuent en même temps Vitesse rapide : transcription : 15 codons par seconde

migration des ARNm vers le cytoplasme  favorise l’initiation de la traduction  stabilise l‘extrémité 5’ des ARNm 1.2. l ’extrémité 3 ’ de l ’ARN hn est modifiée L ’extrémité 3 ’ de l ’ARN hn est modifiée reconnaissance d’un motif de polyadénylation par CstF et CPSF -AAUAAA-AAUAAA- arrêt de l ’ARN pol II, clivage de l’ARN par une endonucléase spécifique intervention de la poly A polymérase qui qui ajoute des motifs adényliques en présence d’ ATP, stabilisation de l’extrémité

le cadre de lecture de la séquence codante la séquence codante ou coding DNA sequence (CDS) constituée de l'alternance des exons et des introns le codon stop La région 3' transcrite mais non traduite (3' UTR = untranslated region) le site de polyadénylation le début de la queur polyA+  Séquences du NCBI Quelques astuces pour travailler avec les séquences avec les bases de données de NCBI ! Ouvrez le site "Pubmed" http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez dans la boite de dialogue du haut, inscrivez en

il y a synthèse d'un ARN prémessager qui contient l'ensemble de la séquence nucléotidique du gène comprise entre le site d'initiation de la transcription (+l) et le site de polyadénylation (A) L'ARN prémessager doit subir une maturation en 3 étapes successives: formation de la coiffe en 5’ épissage des exons polyadénylation en 3’ Maturation et épissage: généralités La représentation classique de l'ARN prémessager avec ses introns et ses exons n'a pas d'existence réelle car on sait aujourd'hui

QUEUE POLYA EN 3' : Le site de polyadénylation est codé au niveau du gène. Le site de clivage déterminé par le dinucléotide CA est entouré par une séquence AAUAAA très conservée située 10 à 30 nucléotides en amont du site de clivage, et par une séquence DSE (DownStream Element) riche en U ou en GU situé une trentaine de nucléotides en aval du site de clivage. La séquence AAUAAA est reconnue spécifiquement par un complexe protéique appelé CPSF (Cleavage and Polyadenylation Specific Factor), et la séquence

queue polyA en 3' Le site de polyadénylation est codé au niveau du gène. Le site de clivage déterminé par le dinucléotide CA est entouré par une séquence AAUAAA très conservée située 10 à 30 nucléotides en amont du site de clivage, et par une séquence DSE (DownStream Element) riche en U ou en GU situé une trentaine de nucléotides en aval du site de clivage. La séquence AAUAAA est reconnue spécifiquement par un complexe protéique appelé CPSF (Cleavage and Polyadenylation Specific Factor), et la séquence

dvpés →produire des versions de protéines ressemblant d’avantage à la forme native  Propriétés des vecteurs d’expression eucaryote équivalentes à celles de leurs homologues procaryotes en plus de caractères supplémentaires (séquences signaux de polyadenylation)  Ex : vecteur navette  ¢ hôte ( levure,¢ d’insecte, ¢ de mammifères) IV – LE GENIE GENETIQUE DS L’INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE IV-1 TECHNIQUES UTILISEES POUR SYNTHETISER UNE PROTEINE Pourquoi utiliser l’ADNc plutôt que l’ADN? ADN eucaryote