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Pages: 20 (4793 mots) Publié le: 7 janvier 2014
Université Cadi Ayyad
Faculté des sciences et techniques

RAPPORT DE TP
D’ENZYMOLOGIE

Réalisé par :

Encadré par Professeur :

EL AIRAJ Hicham Master BioDDAr

- Mme. Z.TALIBI ALAOUI

EL AOUAME Soukaina

ISA1

-Mme.K.BENDIAB

EL BADDOURI Siham

ISA1

RPPORT DE TP D’ENZYMOLOGIE
14 décembre 2009

Sommaire
I.Introduction-----------------------------------------------------------------1
Extraction de l’invertase par autolysat de levure------------------------3

II.

Dosage des sucres réducteurs au 3.5-dinitrosalicylate--------------------3

III.

Etude de la cinétique d’hydrolyse-------------------------------------------5

IV.

Dosage des protéines par la méthode de Lowry--------------------------12

V.

Influence de la concentration enenzyme----------------------------------17

VI.

Influence de la concentration en substrat et détermination du type
d’inhibition---------------------------------------------------------------------20

VII.

Influence du pH sur la réaction enzymatique------------------------------24

VIII.

Influence de la température sur la réaction enzymatique ----------------26
A. Détermination de latempérature optimale--------------------------26
B. Etude de la dénaturation---------------------------------------------- 28

IX.

Immobilisation de l’invertase------------------------------------------------32

Conclusion----------------------------------------------------------------------36

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RPPORT DE TP D’ENZYMOLOGIE
14 décembre 2009

Introduction
Le saccharose, ou sucroseest plus simplement le sucre commercial extrait de la betterave
sucrose,
sucrière ou de la canne à sucre. Le saccharose est une molécule organi
sucre.
organique composée de
carbone, d'hydrogène et d'oxygène. Ce sucre est le constituant du sucre blanc courant.
Le saccharose est un diholoside formé par la condensation de 2 oses : une molécule de
glucose et une molécule de fructose Son nomofficiel est le β-D-fructofuranosyl
fructose.
fructofuranosyl-(2↔1)-α-Dglucopyranoside.

Saccharose

Hydrolyse du saccharose (Il exist plusieurs types d'hydrolyses) :
existe

o L'hydrolyse chimique (en milieu acide)
o L'hydrolyse par résine échangeuse d'ion, cette technique permettant de
contrôler le pourcentage de saccharose qui sera inverti.
L'hydrolyse enzymatique. Elle est fonction dela température, du pH et de la concentration. Les deux
enzymes entrant en jeu sont l'α-glucosidase et la β-fructosidase ou invertine.
glucosidase

Réaction principale (hydrolyse enzymatique :
hydrolyse enzymatique)

b-fructosidase
Saccharose + H2O

glucose + fructose
Sucre inverti (réducteur)

En présence d'eau et à température modérée, soit 37 °C, le saccharose, par l'effet de l'
,l'enzyme
invertase, s'hydrolyse en glucose et en fructose, ce qui permet son assim
,
assimilation par
l'organisme.
Le mélange produit par l'hydrolyse est un mélange équimolaire de glucose et de fructose,
appelé sucre inverti. Il est néanmoins exceptionnel de trouver un sirop dans lequel la réaction
.
a été complète et on trouvera souvent jusqu'à 30% de saccharose résiduel.
n
L'invertase(EC 3.2.1.26 ) est une enzyme de la famille des saccharases. Elle est présente dans
.
la muqueuse de l'intestin grêle et son rôle est l'hydrolyse du saccharose alimentaire (sucre).
intestin

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14 décembre 2009

Chez les abeilles l'invertase est utilisée pour convertir le nectar en miel.
Dans l'industrie alimentaire, à l'instar des abeilles, l'invertase estutilisée pour produire le
sucre inverti en scindant le saccharose en une molécule de fructose et une de glucose et ainsi
améliorer la durée de vie des produits.
Sous sa forme industrielle, l'invertase est extraite des levures : en effet elle se trouve dans leur
paroi interne voire dans leur vacuole.

3

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14 décembre 2009

I.

Extraction de l’invertase par...
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