Clonage de molécules d'adn de phage
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Clonage de molécules d'ADN du phage l à l'aide de plasmides pBluescript et de bactéries Escherichia coli.Résumé
Le clonage consiste à isoler un fragment d'ADN, l'introduire dans un vecteur et le reproduire en grand nombre. Cette technique permet de produire des molécules trop complexe à synthétiser par voie chimique et offre une alternative plus intéressante. Ici, par utilisation de plasmide pBluescript nous souhaitions obtenir plusieurs clones d'une molécule d'ADN. Pour se faire, grâce aux enzymes de restriction EcoRI et Hind III, l'ADN et le plasmide furent digérés. Par l'emploi de ligase, nous pouvions effectuer la ligation des fragments d'ADN aux plasmides. Après transformation et culture des bactéries dans des boites de Pétri, les clones sélectionnés ont été analysé par électrophorèse sur gel d'agarose afin de vérifier la qualité des solutions de plasmides recombinés.
Introduction
L’acide désoxyribonucléique, ou ADN, est une molécule, présente dans toutes les cellules vivantes, qui renferme l'ensemble des informations nécessaires au développement et au fonctionnement d'un organisme. Il porte l'information génétique et constitue le génome (ensemble des gènes) des êtres vivants. Pour comprendre le fonctionnement de ces gènes, il est nécessaire de les isoler. La méthode que nous utilisons pour cela est le clonage.
Le clonage désigne principalement deux processus. D'une part, le fait de reproduire des organismes vivants (simples cellules ou bien des animaux et des végétaux) pour obtenir des êtres génétiquement identiques. D'autre part, une technique de biologie moléculaire qui consiste à isoler un fragment d’ADN, appelé fragment d’intérêt, et à le multiplier en l’insérant dans un plasmide permettant son amplification. Ainsi, on obtient à partir d’un seul insert, plusieurs copies à l’identique. Ce second processus est le but de notre TP.
Cette technique de biologie moléculaire peut-être utilisée pour un clonage partiel, c'est-à-dire ne portant que