Comment met on en évidence le polymorphisme de l'ADN
L'ADN est extrait d'un petit échantillon
Il est coupé par une enzyme de restriction appropriée
Les fragments obtenus, caractéristiques de chaque personne, sont séparés, selon leur taille, par électrophorèse
Certains fragments bien précis sont séparés à l'aide d'une "sonde" radioactive
Leur position, variable selon les individus est alors visualisée sur un film photographique
Pour mieux comprendre et visualiser le déroulement voici les étapes décrites et détaillées qui permettent de mettre en évidence le polymorphisme de l' ADN.
Purification et extraction:
Dès que le laboratoire génétique reçoit les échantillons biologiques prélevés, tous les scientifiques se mettent au travail afin d'en extraire l'ADN.
Le protocole expérimental général de l'extraction est le suivant :
Tout d’abord, on commence par une lyse des cellules, puis une élimination des protéïnes et des acides nucléiques autres que l’ADN tels que l’ARN etc... Enfin, on fait une concentration de l’ADN par une précipitation à l’alcool (éthanol) Il y a de nombreux types d'ADN qui varient selon leur provenance, par exemple de l’ADN génomique, c’est-à-dire en provenance des chromosomes, ou bien de l’ADN plasmidique, c’est-à-dire provenant de plasmides (le plus souvent portés par des cellules bactériennes).
Différentes variantes d'extraction sont utilisées en fonction de la provenance de l’ADN.
Nous ne verrons ici que l'extraction de l'ADN génomique, seul porteur de l'information génétique.
La «Polymerase Chain Reaction» ou PCR:
La «Polymerase Chain Reaction» ou PCR (ou encore ACP pour Amplification en Chaîne par Polymérase), est une technique de réplication de l’ADN. Elle permet d'obtenir, à partir d'un échantillon complexe et peu abondant, d'importantes quantités d'un fragment d'ADN spécifique et de longueur définie. L'ordre de grandeur à retenir est celui du million de copies en quelques heures. C'est, généralement, suffisant pour