Compte rendu du tp : extraction des lipides du jaune d’œuf

Pages: 9 (2192 mots) Publié le: 23 février 2013
Compte rendu du TP : Extraction des lipides du jaune d’œuf
I) But du TP
Ce TP a pour but l’extraction puis la caractérisation des composés lipidiques du jaune d’œuf. Nous avons pour cela réalisé leur extraction par un solvant organique puis les avons discriminés à l’aide de deux chromatographies sur couche mince.
II) Principe du TP
a) Extraction des lipides
Cette première étaped’extraction des lipides du jaune d’œuf repose sur la solubilité des composés lipidiques dans les solvants organiques apolaires. Le solvant utilisé est inerte et ne dénature pas les lipides, nous permettant de tous les retrouver lors de l’analyse. Ici, l’utilisation de jaune d’œuf lyophilisé, c'est-à-dire sans eau, a pour avantage d’éviter tout risque d’interaction polaire antre les composés lipidiqueset cette dernière, assurant ainsi de bonnes conditions d’extraction. Apres passage au vortex afin d’assurer une prise en charge maximale des lipides par le solvant, on laisse décanter la phase solide du mélange afin de ne prélever pour analyse que le solvant contenant les lipides.
b) Première chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince est un procédé permettant laséparation des divers composés chimiques d’un mélange. Elle repose sur un système à deux phases :
* Phase fixe (ou stationnaire), absorbante, ici composée de gel de silice
* Phase mobile, solvant que l’on va faire progresser par capillarité dans la phase fixe, entrainant les différents composés en présence.
La séparation des composés repose sur leur affinité variable pour l’une ou l’autredes deux phases. Lors de la migration, les composés déposés sur la phase fixe vont être entrainés par la phase mobile lors de sa migration. En fonction de leur affinité avec chacune des deux phases, les composés vont être plus ou moins retenus et vont donc parcourir des distances de migration différentes. Ces distances de migration étant caractéristiques de chaque substance chimique, on peut alorsles différencier et les caractériser en les comparants avec des substances témoin.
Dans notre cas, la phase fixe est faite d’un gel de silice. Ce gel est un polymère d’acide silicique Si(OH)4 présentant en surface de très nombreux groupements OH lui conférant une grande polarité. Lors de cette chromatographie, la séparation se fera donc sur un critère de polarité.
Apres migration et avantévaporation du solvant, on repère sa limite de progression (front du solvant) afin de pouvoir, après coloration, calculer les références frontales des différentes taches.
Les taches sont mises en évidence par une coloration au bleu de coomasie.
C’est donc le mélange des différents lipides issus de l’extraction que l’on fait ici migrer, accompagné de différentes substances témoin. La PM utilisée iciest mélange hexane/éther-diéthylique/acide acétique (70 : 30 : 1, v/v/v).
c) Deuxième chromatographie sur couche mince
Le principe reste le même mais on utilise au autre solvant plus polaire (organique et eau) dans le but de caractériser les composés ayant pu migrer au même niveau lors de la première CCM. Ce nouveau solvant va permettre une meilleure migration des composés trop fortement,voir totalement retenus par la silice lors de la première CCM. La présence d’eau dans la PM va permettre une meilleure prise en charge des substances à forte affinité polaire. Elle va également hydrater le gel de silice entrainant une diminution de sa polarité. Elle va alors bien moins retenir les composés à séparer.
III) Résultats et interprétation
CCM 1 : hexane/éther diéthylique/acideacétique
Pour l’extraction nous avons réalisé un solvant chloroforme méthanol (2 : 1, v/v). Pour cela nous avons utilisé 2ml de chloroforme et 1 ml de méthanol.
Nous avons fait un même type de préparation pour l’éluant de la première CCM. Il est composé d’hexane, d’éther diéthylique et d’acide acétique à des proportions de 70 : 30 : 1, v/v/v). Afin d’en obtenir 20mL, nous avons donc utilisé...
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