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Cours 4 Chromatos Colonne

902 mots 4 pages
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Chromatographie s sur colonnes
Approches quantitatives

Suivant le choix de la matrice (Phase stationnaire), les biomolécules peuvent être séparées selon:
• leur taille (chromatographie par filtration sur gel) • leur charge (chromatographie par échange d’ions) • leur capacité à se fixer à des groupements chimiques particuliers (chromatographie

1. chromatographie d'exclusion 2. chromatographie d'adsorption 3. chromatographie de partage 4. chromatographie ionique

I/
Chromatographie
Traditionnelle de partition d’adsorption-exclusion Séparation des protéines par chromatographie : principe L’échantillon est déposé au sommet d’une colonne cylindrique de verre ou de plastique contenant une matrice solide perméable, comme la cellulose ou le cephadex, immergée dans un solvant (éluant).
Une grande quantité de solvant est ensuite pompée lentement à travers la colonne et est collectée dans des tubes séparés au fur et à mesure de sa sortie à l’extrémité inférieure de la colonne (l’élution)
Les divers composants de l’échantillon se déplacent à des vitesses différentes à travers la colonne et sont ainsi fractionnés dans des tubes différents

t0

t1

t2

Solvant
Mélanges de biomolécules AIR

Adsorbant
(phase
stationnaire)
Verre fritté
Robinet
d’élution
La quantité d'adsorbant est telle qu'il occupe une hauteur égale à environ
10 fois le diamètre de la colonne. Prévoir un espace de 10 cm environ au-dessus de

a
T

e l il

Billes de sephadex
Protéines diffusent en s’attachant (+/-) affinité /site
Temps de rétention  ou 

a
T

e l il

Les biomolécules large (PM ) n’entre pas dans les mailles du gel (phase stationnaire) et sont éluées + rapidement
Les biomolécules fines (PM ) rentrent dans les mailles du gel (phase stationnaire) et sont éluées plus tard

é t i
Chromatographie
de Partage l i b u l stationnaire Liquide
Phase
Phase mobile Liquide o S

Support Solide

L’analyte se dissous également dans la phase liquide stationnaire

La chromatographie de partage sépare

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