Détermination de la concentration minimale inhibitrice (cmi) par macrométhode en milieu liquide
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TSTL ; travaux pratiques en microbiologie Activités en microbiologie
Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) par macrométhode en milieu liquide
PREMIER JOUR
Matériel :
• Culture d'Escherichia coli en bouillon nutritif incubée 18 heures à 37°C. Concentration bactérienne estimée à 108 UFC. mL-1.
• Solution mère d'ampicilline de concentration égale à 200 g.mL-1. Structure de l'ampicilline
Manipulation :
1. Préparation de l'inoculum
Réaliser la dilution de la culture d'Escherichia coli en introduisant 100 L de la culture fournie dans 25 mL de bouillon Mueller-Hinton.
La suspension obtenue est appelée "inoculum". Composition du bouillon Mueller-Hinton Infusion de viande de boeuf 300 cm3 Peptones de caséine 17,5 g Amidon 1,5 g
2. Dilution en série de la solution mère d'ampicilline
Réaliser une dilution en série de la solution mère d'ampicilline selon le tableau ci-dessous.
Ajouter dans chaque tube 1 mL de l'inoculum selon le tableau ci-dessous.
Numéro des tubes : 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Eau physiologique stérile (mL) : 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Solution mère d'ampicilline (mL) : 0 1 1 - - - - - - - -
Redistribuer du tube précédent (mL) : - - - 1 1 1 1 1 1 1 1* Inoculum (mL) : 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Concentration finale en ampicilline en g.mL-1 :
* : rejeter 1 mL dans l'eau de Javel
3. Conditions d'incubation
Les tubes de la gamme doivent être incubés 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire.
4. Réalisation des témoins inoculum
Réaliser une dilution en série de l'inoculum, de la dilution 10-1 à la dilution 10-4.
Étaler, sous forme de strie, les dilutions 100, 10-1, 10-2, 10-3 et 10-4 sur deux géloses PCA (Plate Count Agar) pour dénombrement. Les stries sont réalisées à l'anse calibrée de 10 L. Doubler les stries pour les dilutions cibles 10-3 et 10-4.
Incuber 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire.
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