permanganate.
Réaliser deux témoins du dosage en versant, dans 2 erlenmeyers et dans cet ordre : 25 ml de
H2SO4 2% (éprouvette); 1 ml de tampon et 10 ml de H2O2 ≈ 0,01 N (pipette jaugée). La solution d'H2O2 est préparée dans du tampon d'extraction afin que le faible volume de tampon (1ml) ou d'extrait (ci-dessous) soit convenablement tamponné lors de l'incubation. Verser, à la burette, du permanganate de K (0,01 N) jusqu'à apparition et persistance (20 secondes) d'une teinte rose pâle due à un excès de MnO4
-. Noter Vt1 et V t2 les volumes de permanganate.
Réaliser également chaque dosage du maïs et de l'orge en double. Pipeter (pipette jaugée) dans des erlenmeyers 10 ml d'eau oxygénée (≈ 0,01 N). Au temps zéro ajouter (PE) 1 ml d'extrait enzymatique et agiter. Laisser incuber à température ambiante : 5 mn pour l'orge ; 30 mn pour le maïs. La disparition de H2O2 n’est pas linéaire avec le temps ; c’est une réaction d’ordre 1
(exponentielle inverse) ; ces temps sont prévus pour qu’environ 50 % de H2O2 soit consommés.

En présence d'enzyme et d'eau oxygénée les phénols peuvent s'oxyder. Le dosage est réalisé en utilisant le gaïacol, (méthoxy 2-phénol) incolore, qui est oxydé en un produit orangé (tétragaïacol) dosé par spectrophotométrie.
4 gaïacol + 4 H2O2 → tétragaïacol + 4 H2O
3.2 Manipulation
Diluer l'extrait enzymatique au 1/10 avec du tampon d'extraction : dans un tube à essais introduire
(PE1) 1 ml d’extrait enzymatique brut (pipette) et 9 ml de tampon (pipette). Homogénéiser ce mélange (VD). Régler le spectrophotomètre à 470 nm ; faire le zéro avec un tube rempli d'eau distillée. Prendre un tube de spectrophotomètre et un carré de parafilm. Introduire successivement dans un tube de spectrophotomètre : 1 ml de H2O2 ≈ 0,01 N (pipette) ; 1 ml de gaïacol 0,2 % (pipette); 1 ml (PE2) d’extrait dilué (pipette soigneusement rincée). Ceci constitue le mélange réactionnel
(VR). Boucher le tube avec du Parafilm afin d’homogénéiser le tube par